第14章+免疫学应用PPT.ppt

双抗原夹心法 1.将抗原包被在固相载体上 2.如样品中含有抗体，则结合为抗原抗体复合物 3.再加入酶标记抗原，则结合为抗原-抗体-酶标记抗原复合物 4.酶催化底物并显色 酶 抗原 酶标记 抗原 抗体 抗原 固相载体 包被待测抗原 测定 加底物显色 封阻/封闭 加已知抗体 加酶标二抗 洗涤/洗脱 洗涤/洗脱 洗涤/洗脱 洗涤/洗脱 b、间接法（indirect ELISA） “免疫标记技术”小结 荧光标记法 酶联免疫吸附试验 放射性标记法 直 接荧光法 间 接荧光法 夹心法 间接法 SAS—ELISA 已知抗体包被于固相载体，加待测抗原，再加酶标抗体，显色；反之亦然（先加已知抗原） 免疫印迹法 标记抗原或者一抗 流式细胞术 抗原包被于固相载体，加酶标一抗，再加酶标二抗，显色 标记二抗 标记物与未标记的待测物和对应的抗原或抗体竞争性结合，测定剩余的带放射性标记的免疫复合物的量。灵敏度极高 第二节 免疫学预防 老问题思考 第一次患严重疾病而病愈，第二次遭受同一严重疾病，患病结果会怎样？怎么解释？ 物理、化学 是给机体输入抗原性物质，剌激机体产生特异性免疫力 一、人工主动免疫 人工变异 1. 死疫苗 2. 减毒活疫苗 病原菌（致病性）、抗原（毒性） 杀死的微生物 减毒或无毒的活的病原微生物 从自然界筛选 第十四章 免疫学应用 主要内容 第一节 免疫学检测（重点） 一、抗体的制备（已讲述） 二、抗原抗体的检测 三、免疫细胞的检测（自学） 第二节 免疫学预防（重点） 一、人工主动免疫 二、人工被动免疫 第三节 免疫学治疗（自学） 第一节、免疫学检测 二、抗原抗体的检测 1 抗原抗体反应的特点 3 抗原或抗体的检测方法 2 抗原抗体反应的主要因素 一、抗体的制备（已讲述） 三、免疫细胞的检测（自学） 1. 抗原抗体反应的特点 二、抗原抗体的检测 ?（1）特异性 ?（2）可见性 ?（3）可逆性 ?（1）特异性 问题思考： 1、抗原分子表面与抗体特异性结合的化学基团称为____？ A、共同抗原 B、同种异型抗原 C、交叉抗原 D、表位 2、抗体分子与抗原表位特异性结合的结构区域称为____？ A、Fc B、CH C、CDR D、CL E、 铰链区 F、骨架区 G、HVR Ab 过剩 Ag 过剩 比例适当，交联成网络 ?（2）可见性 ? （3）可逆性 K（亲和常数）= Ag+Ab Ag Ab ? 疏水作用力*：两个疏水基团对水排斥而趋向聚集 范德华力：原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化发生的引力 氢键结合力：氢原子与氢受体原子间的引力 静电引力：带相反电荷的氨基和羧基，与距离有关 2. 抗原抗体反应的主要影响因素 ? （1）抗原和抗体的浓度、比例 ? （2）电解质 ? （3）温度 ? （4）酸碱度 0.85%的NaCl 37℃ pH 6~8 ? （1）凝集反应 ? （2）沉淀反应 ? （3）补体参加的反应（自学） ? （4）免疫标记技术 3. 抗原或抗体的检测方法 ①直接凝集反应 颗粒性Ag与相应Ab，出现肉眼可见的凝集团 玻片法 ? （1）凝集反应 细菌、细胞等颗粒状物质 在电解质存在的情况下 血型 A B AB O 测ABO血型 颗粒性Ag与相应Ab，出现肉眼可见的凝集团 试管法 细菌、细胞等颗粒状物质 在电解质存在的情况下 诊断布氏菌病 临床诊断伤寒 （肥达氏反应，Widal reaction） + ②间接凝集反应 + 可溶性Ag/Ab先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，再与相应Ab/Ag产生凝集反应 可溶性Ag 类风湿因子检测 致敏颗粒 颗粒性Ag 红细胞 聚苯乙烯乳胶颗粒 活性碳 脑膜炎检测 可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物 抗体浓度不变，抗原浓度不断上升免疫沉淀反应变化图 ? （2）沉淀反应 出现沉淀量最多的管为最适比例管 可溶性抗原：毒素、组织浸液及血清中的蛋白等 试管法之一：环状沉淀实验 课堂思考：试管法的主要优缺点？ 刘奥 付新文 韩浏 倾注平板 ①、单向免疫扩散试验 打孔 加样 放置37℃ 24～48h观察 24～48h观察 如何使扩散变快？ ②、火箭电泳 ⑤、免疫比浊 ④、免疫电泳 ③、双向免疫扩散 “凝集反应和沉淀反应”小结 凝集反应 沉 淀 反 应 补体参与的反应 直接凝集 间接凝