实时荧光定量PCR技术原理及其仪器分析PPT.pptVIP

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2018-06-06 发布于江苏
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实时荧光定量PCR技术原理及其仪器分析PPT

实时荧光定量PCR技术原理及其仪器分析;PCR;;;实时荧光定量PCR;;;荧光标记与探针类型;非特异性荧光标记： 1、 SYBR Green 特异性荧光标记： 2、TaqMan 3、Molecular Beacon ;SYBR Green ;SYBR Green 法工作机理;;起始模板的测定基因型的分析融解曲线分析：可以优化PCR反应的条件，对常规PCR有指导意义，如对primer的评价；可以区分单一引物、引物二聚体、变异产物、多种产物。 ; 对DNA模板没有选择性 ----适用于任何DNA 使用方便 -----不必设计复杂探针非常灵敏便宜;与目标序列互补;; 对目标序列的高特异性 ------阴性结果确定设计相对简单 ------与目标序列某一区域互补重复性比较好;分子信标法;应用范围;高特异性：对目标序列检测SNP最灵敏的试剂之一荧光背景低;荧光PRC的系统结构;热模块系统;光学系统;荧光检测系统;分析系统;使用方法;使用注意事项;常见问题;荧光定量PCR的定量分析是根据标准曲线的每个标本的Ct值进行的。在获得各个标本的PCR扩增曲线后，计算机软件自动确定用于定量分析的Ct值。; 采用已知物的标准曲线来定量未知目的物。 ;;相对定量分析;;标准曲线制作;荧光PCR的局限性;与传统PCR相比的不足之处;荧光PCR应用实例;;Thank You!