动物细胞、组织及早期胚胎发育观察.pptVIP

实验10.动物细胞、组织及早期胚胎发育观察 一、实验目标 1、掌握动物细胞、组织平铺片等临时装片和涂片的一般制作方法； 2、掌握动物细胞基本结构及有丝分裂各期的特点，以及四类基本组织的结构和功能； 3、了解多细胞动物早期发育的一般过程，从而加深对多细胞动物起源的理解。 二、实验内容 1、人体口腔上皮细胞临时装片的制备与观察；（重点） 2、活蛙的疏松结缔组织与血液组织、蝗虫浸制标本的横纹肌等临时装片和涂片的制备与观察； （重点、难点） 3、马蛔虫受精卵的有丝分裂、动物四类基本组织（上皮、结缔、肌肉、神经）玻片标本观察； 4、海胆（或文昌鱼）和蛙的早期胚胎发育过程（受精卵、卵裂、囊胚期、原肠胚期等）玻片标本比较观察。 三、实验材料、仪器及用品 活蛙，蝗虫浸制标本，马蛔虫受精卵有丝分裂玻片标本，动物四类基本组织玻片标本，海星或文昌鱼早期胚胎发育的玻片标本，动物的细胞及其分裂、组织和多细胞动物早期胚胎发育等的多媒体课件。显微互动教学系统。 蜡盘、解剖剪、小镊子、解剖针、大头针、10 mL注射器、染色缸、载玻片、盖玻片、滴管、无菌牙签、碘酊、乙醚、甲醇、甘油、0.7%生理盐水、0.9%生理盐水、0.1%亚甲基蓝、0.1mol/L碘液、0.02%詹纳斯绿B染液、姬姆萨染液、1%硝酸银、蒸馏水、吸水纸等。 四、方法步骤 实验安排： 活蛙、蝗虫浸制标本材料4人各共用1只；其余内容1人一组进行实验。 （一）动物细胞、组织临时装片和涂片制作 人口腔上皮细胞临时装片的制备与观察 活蛙肠系膜平铺片制作与观察 活蛙血液组织涂片制作与观察 蝗虫横纹肌临时装片制作与观察 1、人口腔上皮细胞临时装片的制备与观察 洁净的载玻片和盖玻片；0.9%生理盐水；无菌牙签； 口腔颊部. 漱口→刮取 → 涂布 → 盖片 → 染色（碘液、亚甲基蓝、中性红；詹纳斯绿B） [操作要点] 取材：用无菌牙签在口腔颊部轻轻刮取口腔黏膜细胞，勿将深部细胞刮下。 涂片：材料均匀分散，细胞不重叠，以易于观察. 加盖玻片：镊子夹住盖玻片的一侧，将另一侧首先接触载玻片和溶液，然后慢慢放下盖玻片，避免产生气泡。 显示线粒体：在涂布口腔黏膜细胞后，即刻染色，以保证活细胞染色。 2、制作蛙肠系膜平铺片（铺片法） 活蛙；0.7%生理盐水；1%硝酸银；蒸馏水；甘油. 处死 → 固定→ 剖腹 → 取膜 → 挑开展平 → 银染 → 光照 → 冲洗 → 加油 → 盖片 [操作要点] 完好地剪取肠系膜并平铺于载玻片上是本实验成功的关键。当用眼科剪剪取肠系膜时，应用镊子夹住剪开的膜的边缘，防止膜皱缩成团。用镊子将膜放置于载玻片上后，再用解剖针将膜铺平。 载（盖）玻片洁净。 3、制备蛙血涂片标本（推片法） 蛙心脏； 注射器； 甲醇； 姬姆萨. 抽血 → 推片 → 风干 → 固定 → 染色 → 冲洗 → 晾干 [操作要点] 涂血片后，及时晃动玻片，使血片迅速干燥即固定；空气中干燥时间过长细胞易变形，影响观察和测量。 推片时应保持一定的速度和两片间的角度，连续推进，不要中断，以免血片厚薄不一。 血片的厚薄，可由血滴大小、推片速度和两片间夹角的大小来调节。血滴小，推进速度慢，两片间夹角角度小，则血片薄；反之则厚。厚的血片适于做血细胞分类，容易找到白细胞。 4、制作蝗虫骨骼肌装片（分离法） 蝗虫； 解剖针； 0.1%亚甲基蓝. 取胸部肌肉 → 分离肌纤维（越细越好）→ 染色 → 盖片 [操作要点] 用解剖针分离肌丝时越细越好。 （二）动物细胞、组织及早期胚胎发育装片标本观察 马蛔虫受精卵有丝分裂装片观察 动物四类基本组织装片标本观察 海星或蛙早期胚胎发育各期装片标本观察 作业： 1. 绘人口腔黏膜上皮细胞结构图，并注明各部分名称； 2. 绘出4类基本组织其中一种组织结构图，并注明各部分名称。 几点注意： 1、实验前必须预习，并写出预习报告，每次实验前将检查； 2、实验报告统一要求用HB铅笔写字、2H或 3H铅笔绘图； 3、须当堂上交实验报告于实验员老师手。 实验报告格式 一、实验目的 二、实验内容 三、主要实验材料、仪器及用品 四、实验方法步骤（扼要摘抄，图解式） （以上为预习报告部分） 五、实验结果与分析 （含观察到的实验现象、老师要求的绘图作业、实验成功与失败的原因总结等） * * 人口腔上皮细胞 詹纳斯绿B液染色示线粒体 未染色 人口腔上皮细胞 （碘液染色） 蛙肠系膜扁平上皮组织 （硝酸银染色） 蛙肠系膜扁平上皮组织 （硝酸银染色） 蛙血液涂片 蝗虫横纹肌 实验结束观看多媒体教学片, 对照自己所做实验过程，总结得与失.