儿童感染幽门螺旋杆菌的克拉霉素耐药菌株的鉴定及23srrna基因多态性分-identification of clarithromycin-resistant strains infected with helicobacter pylori in children and polymorphism of 23 srrna gene.docx

儿童感染幽门螺旋杆菌的克拉霉素耐药菌株的鉴定及 23S rRNA 基因多态性分析专业：儿科学研究生：宋亚萍导师：蒋红雨、朱莉摘要：目的 了解贵阳地区儿童感染 H.pylori 克拉霉素耐药情况，对耐药 菌株进行基因多态性分析，探索点突变与耐药性之间的相关性，为临床儿童根除 HP 治疗药物的选择提供参考依据。方法 在胃镜下在取胃窦部粘膜组织进行快速 尿素酶实验，对实验阳性患者的胃窦部粘膜组织进行分离培养，分离培养后对幽 门螺杆菌菌株进行克拉 霉素耐药实验， 用限制性片段长度多态性分析 方 法 (restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP)检测 16 例克拉霉素耐药菌 株和 16 例克拉霉素敏感菌株的 23S rRNA 的多态性，然后用χ2 检验。结果 ①在 192 例快速尿素酶阳性的胃黏膜标本中，幽门螺杆菌（H.pylori）培养阳性率为42.70%（82/192），经药敏试验后得到克拉霉素耐药菌株 16 株，占 19.51%；克 拉霉素敏感菌株 66 株，占 80.49%；未发现克拉霉素中介株；②23S rRNA 的 2143 位点在克拉霉素耐药组和克拉霉素敏感组均存在 AA、AG、GG 三种基因型。该位 点在两组间的分布有显著性差异，χ2 =6.905， P＜0.05。③两组间等位基因携 带者克拉霉素耐药危险性高于非携带者，χ2 =7.340， P＜0.01。④两组幽门螺 杆菌菌株的 2143 位点 A 等位基因的频率分别为 46.88%、71.88%，G 等位基因的 频率分别为 53.12%、28.12%，两组之间等位基因分布有显著差异，χ2 = 4.146， P＜0.05。OR（G/A）= 2.896，95%CI［1.027-8.172］。结论：①本地区幽门螺杆 菌菌株克拉霉素耐药率为 19.51%。②本地区分离的克拉霉素耐药菌株 23S rRNA 存在 2143 位点突变；③2143 位点 G 等位基因与克拉霉素耐药间存在相关性。?关键词：儿童；幽门螺杆菌；克拉霉素；耐药；PCR-RFLP前言自 1982 年澳大利亚的学者 Warren 及 Marshall 成功从人胃粘膜中分离出 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori , Hp）以来，各国学者对幽门螺杆菌的研 究从微生物特性到致病机制再到诊断治疗都做了深入的研究。幽门螺旋杆菌主 要通过口-口及粪-口途径传播，其感染宿主大部分发生在儿童期，大部分宿主 终身带菌［1］。幽门螺旋杆菌是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关性淋 巴组织淋巴瘤和胃癌的主要致病因素［2］，1994 年世界卫生组织国际癌症研究机 构（WTO/IARC）将幽门螺旋杆菌定为Ⅰ类致癌原［3］。据相关流行病调查资料显示儿童是受 Hp 侵袭的最危险人群，尤其是小年龄 组幼儿是感染 Hp 的最主要年龄阶段，据报道儿童幽门螺杆菌的感染发生溃疡的 机会是非感染者的 4 倍［33］，也是造成确 IDA 的重要因素，初次之外有学者报道 幽门螺杆菌感染与儿童反复上腹痛、慢性荨麻疹［31］、VG［32］等疾病都具有相关性。 儿童期感染 Hp 直接影响以后的生活质量,儿童期根除 Hp 感染可降低活动性胃 炎、消化道溃疡、胃淋巴瘤、胃腺癌等的发病率。目前我国临床上针对儿童感 染幽门螺旋杆菌的根除治疗多为 PPI+阿莫西林+克拉霉素的三联疗法；据欧洲一 项幽门螺杆菌耐药情况多中心监测显示，阿莫西林耐药率为 0.3%，克拉霉素耐 药率为 31.8%［4］；日本相关调查研究显示克拉霉素、阿莫西林的耐药率分别为 24%、0%［34］。亚太共识中各地区耐药情况均指出阿莫西林的耐药率较低，临床对 治疗方案的选择关键在克拉霉素的耐药率的高低［36］，Maastricht-Ⅲ共识推荐两 种治疗方案，指出并强调了针对克拉霉素耐药率大于 15%-20%的地区建议检测克 拉霉素耐药情况，并针对耐药情况选择不同的治疗方案［6］。在根除幽门螺杆菌的治疗中克拉霉素起着关键作用，其作用机制主要与细 菌核糖体上的 50 大亚基结合，作用于 23S rRNA V 区的多肽转移酶环，抑制核 糖体的移位过程，阻止肽链延长，抑制蛋白合成，这一过程通过抑制蛋白质合 成而起到抑菌作用［7-10］。随着幽门螺杆菌根除率的降低及克拉霉素耐药率的增 高，国内外学者对幽门螺杆菌克拉霉素耐药的分子生物学机制进行研究，研究 表明克拉霉素耐药与 23S rRNA 基因多态性具有相关性。目前发现克拉霉素耐药 菌株 23S rRNA 存在 A2142G、A2142C、A2143G、A2144G、T2182C、T2183C、T2245C等突变位点，其中以 A2143G 的突变率最高。本课题在幽门螺杆菌微生物特性及致病机制的基础上