glimir124aurka调控模型的构建及其在神经胶质瘤中的作用-establishment of gli mir 124 aurka regulatory model and its role in glioma.docxVIP

下载本文档

7
0
约5.41万字
约 56页
2018-06-04 发布于上海
举报
版权申诉

glimir124aurka调控模型的构建及其在神经胶质瘤中的作用-establishment of gli mir 124 aurka regulatory model and its role in glioma.docx

1、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

glimir124aurka调控模型的构建及其在神经胶质瘤中的作用-establishment of gli mir 124 aurka regulatory model and its role in glioma

摘要研究背景：Hedgehog信号通路在调控细胞生长、分化和肿瘤发生发展过程中发挥重要作用。在生殖细胞中Hh 信号转导通路的异常激活往往造成发育过程紊乱；在体细胞中Hh 信号转导通路的异常活化则往往伴随多种癌症的发生。肿瘤是在遗传因素和环境因素的共同作用下，细胞周期紊乱和细胞生长失控所致的一类疾病。大量研究表明：肿瘤发生的关键在于肿瘤相关基因的转录失控。某些蛋白作为反式作用因子（trans acting factors）与其他基因的顺式作用元件（cis acting elements）相互作用，实现对肿瘤相关基因转录水平的调控。因此，深入研究肿瘤相关基因的反式作用因子有助于我们了解肿瘤相关基因的表达调控机制。转录因子GLI（Glioma-associatedoncogenetranscriptionfactors,GLI）位于Hh信号通路级联传导的末端，是通路上的关键调控因子，在信号传导中起枢纽作用。研究表明GLI功能异常可能参与多种肿瘤发生发展，但调控机制有待明晰。有研究报道抑制GLI能降低神经胶质瘤细胞增殖与侵袭能力，基因芯片结果也证实GLI抑制的癌细胞中microRNAs 的表达发生类似改变，提示受其调控的microRNAs在神经胶质瘤形成及发展过程中可能发挥重要作用。研究目的：1.本课题以GLI为研究靶标，根据生物信息学方法预测具有GLI结合元件的microRNAs，结合基因芯片数据，采用实时定量PCR及Western Blot 等手段，证明miR-124 为受GLI调控的microRNA，并确定AURKA为其下游靶基因，从而建立“GLI/miR-124/AURKA”信号轴。2.研究与神经胶质瘤密切相关的microRNAs，特别是miR-124 的功能，从分子、细胞和临床水平三个层面分别验证“GLI/miR-124/AURKA”信号轴的正确性，揭示“GLI/miR-124/AURKA”信号轴与神经胶质瘤的关系，丰富Hh-GLI信号网络的调控机制，为寻找神经胶质瘤诊疗新靶点提供理论依据。研究内容：1. 前期研究中，我们发现在GANT61处理的神经胶质瘤细胞中许多重要信号通路相关基因的表达发生显著改变，利用生物信息学方法对在GLI抑制条件下的差异表达基因进行GLI结合位点预测分析，发现存在一定数量的差异表达II基因不含有已知的GLI蛋白转录结合区域，因此我们提出“转录因子/microRNAs/间接靶基因”的调控模型。2.利用特异性小分子抑制剂下调GLI的表达后，通过基因芯片技术分析microRNAs表达谱变化；同时用生物信息学方法对差异表达的microRNAs进行归类分析；采用实时定量PCR技术对富集于某些信号通路的差异microRNAs 进行验证。通过分析microRNAs 表达谱芯片发现，经GANT61处理后的神经胶质瘤细胞系中，miR-519a、miR-335和miR-124等microRNAs表达水平升高，经过多重验证后，我们优先选取miR-124 进行后续的功能研究。3. 采用多个数据库（TargetScan 算法、基于序列互补的miRanda、基于热力学模型的PicTar）预测，结合基因芯片差异表达谱结果分析，选定AURKA作为miR-124 的下游靶基因，电转染法高表达miR-124 后检测下游靶基因的变化（包括mRNA水平和蛋白水平等方面），对受microRNAs 调控的靶基因进行验证。4.在H4细胞中，通过GLI的特异性抑制剂GANT61处理、干扰质粒下调GLI2 和高表达miR-124 等手段，检测相应组分的mRNA水平及蛋白水平的变化情况，验证并确立“GLI/miR-124/AURKA”信号轴的正确性，采用流式细胞仪检测信号轴对细胞周期的影响。5. 在临床样本水平上，通过免疫组化法以及WesternBlot法检测GLI2与AURKA的表达水平，分析二者相关性，揭示出“GLI/miR-124/AURKA”信号轴在神经胶质瘤发生发展中的临床意义。研究结果：1. Hedgehog信号通路中存在“GLI/miR-124/AURKA”信号轴。2. “GLI/miR-124/AURKA”信号轴的调控节点为GLI2，并在临床样本水平上发现GLI2 与AURKA的表达存在相关性。3. “GLI/miR-124/AURKA”信号轴能够通过影响神经胶质瘤细胞周期调控肿瘤细胞的生长。关键词：Hedgehog信号通路，神经胶质瘤，GLI，hsa-miR-124，AURKAIIIABSTRACTBackground：Hedgehog(Hh)signalingpathwayplaysanimportantroleintheregulationof cellgrowth,differentiation,andtumordevel