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第五章 细菌检验技术 ;;学习目标： 掌握：革兰染色的原理、操作及结果判断；细菌接种技 术、培养方法、细菌在不同培养基中的生长现象、生化反应的原理。 熟悉：细菌染色标本检查的基本程序，细菌培养常用培养基和器材。 了解：细菌不染色标本的检查方法和用途；免疫学技术、分子生物学技术及自动化检测技术等鉴定微生物。 本章重点：★革兰染色的原理、操作方法及意义 ★细菌培养及生长现象 ★细菌生化反应及临床应用;第一节 细菌形态检验技术;1. 单染色法 细菌标本经涂片、干燥固定后，滴加染液染色1分钟，水洗后待玻片燥后即可镜检;（二）常用的染色方法 2. 革兰染色法 【方法】 ;（二）常用的染色方法 2. 革兰染色法 【结果】 ;（二）常用的染色方法 3. 抗酸染色法 【结果】 ;（三）其他染色法 1. 特殊结构染色法 （1）荚膜染色法;（三）其他染色法 1. 特殊结构染色法 （2）鞭毛染色法 ;（三）其他染色法 1. 特殊结构染色法 （3）芽孢染色法 ;（三）其他染色法 1. 特殊结构染色法 （4）异染颗粒染色法 ;（三）其他染色法 1. 负染色法 ;第一节 细菌形态检验技术;二、不染色标本镜检 2. 悬滴法 ;三、其他显微镜检查;第二节 细菌接种与培养技术;培 养 箱; 培养基成份;基础培养基：普通琼脂平板 营养培养基：满足营养需求较高细菌的生长，如血琼脂平板、巧克力琼脂平板等 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖铁培养基（KIA）及各种生化反应用培养基 选择培养基：具有选择性抑制非目的菌生长作用，用于选择性培养目的菌，如SS平板、中国蓝琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板等 增菌培养基：用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤、GN增菌肉汤 特殊培养基：厌氧培养基、L型细菌培养基;培养基;液体培养基;培养基的种类（按物理性状分类）;培养基灭菌; （一）无菌技术; ;分区划线法;连续划线法;斜面接种;（三）细菌培养方法;三、细菌的生长现象;细菌在液体培养基??生长现象;一、碳水化合物的代谢试验;一、碳水化合物的代谢试验; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; 红色为阳性 无色为阴性 ; ; ; ; ;第四节 微生物检验的自动化和微型化;2．仪器的基本结构和配套试剂 全自动恒温孵育系统包括恒温装置和震荡培养装置，仪器培养瓶容量常分为60瓶、120瓶、240瓶等，对培养瓶进行震荡恒温培养，温度常设为37℃。仪器均配置电脑，在电脑上可设置培养时间、温度等参数，显示阳性或阴性瓶所在的位置，及自动分析。 3．注意事项及结果报告制度 （1）培养瓶的选择 如果患者未使用抗生素，可选择一般需氧菌培养瓶，如果已经使用抗生素则选用可中和血液中抗生素的培养瓶。如怀疑厌氧菌、L型菌、真菌、分枝杆感染，则选用厌氧菌培养瓶、L型菌培养瓶、真菌培养瓶、分枝杆菌培养瓶。 （2）采血时间 对入院患者中有高热、寒战、白细胞增多或疑有感染者，最好在使用抗生素前采血送检。住院患者出现发热等败血症症状时，应及时采血，尽可能在使用抗生素前采血。已使用抗生素的患者最好在下次使用抗生素前采血。;（3）采血量 采血量一般为血培养瓶中肉汤培养基量的1/4-1/5为宜，成人一般每次采集3-10ml，以8-10ml最佳，小儿一般每次采集1-3ml即可。每天最好采血2-3次，以提高检出率，并帮助判断是感染菌或污染菌。 （4）采血方法 一般多从肘静脉采血，采集前应严格消毒采血部位，采血过程中注意无菌操作，否则易被皮肤表面细菌污染，导致假阳性。使用真空采血系统，利用配套的一次性使用的无菌采血管，血液因负压作用进入培养瓶中。 （5）标本送检 采血后应及时送检，检验者收到血培养瓶后应尽快上机。如不能及时送检，应将血培养瓶放置室温保存。 ;（二）自动分枝杆菌培养检测系统 多数自动血培养检测系统可检测血液中的分枝杆菌，目前针对分枝杆菌有专门的自动分枝杆菌培养检测系统，可对各类标本中的分枝杆菌进行培养及检测，原理基本同自动血培养检测系统，配套专门的培养瓶。 一般将各类标本直接送检，检验者收到标本后，