一种含rgd小肽rwr设计、合成及功能初探-preliminary study on design, synthesis and function of a small rgd peptide rwr.docxVIP

一种含 RGD 小肽 RWR 的设计、合成及功能初探中文摘要目的：1、设计一种新型的小肽 RWR。2、观测 RWR 对血小板聚集及血栓形成的影响。3、探索 RWR 通过αIIbβ3 抑制血栓形成的机理。4、验证 RWR 的抗栓效果，为含 RGD 抗栓药物的研发提供理论依据。方法：1、RWR 小肽的设计与合成利用 Fmoc 固相法合成化学方法合成 RWR，在 RGD 基础上，增加一个疏水性 氨基酸和一个碱性氨基酸，序列特征为 Arg-Gly-Asp-Trp-Arg，蛋白质一级结构 为 RGDWR，课题组将这种新的化合物命名为 RWR，该小肽具有 RGD 结构， 理论上具备通过血小板表面整合素αIIbβ3 受体从而与血小板特异结合的能力。 2、RWR 对血小板聚集的影响的体外量效关系利用血小板聚集仪检测不同浓度 RWR 对血小板最大聚集率的影响。将家兔 全血分离为 PRP 和 PPP，用 PPP 校零后，在 PRP 管中加入相同剂量的血小板聚 集诱导剂 ADPNa2，再加入不同浓度的 RWR，检测 5min 内的血小板最大聚集率。 用同样的方法检测 RWR 对人血小板聚集率的影响。3、RWR 与替罗非班（tirofiban）、阿司匹林（aspirin）等传统药物相比较，作用 于家兔血小板聚集率分别用不同浓度的替罗非班和阿司匹林作用于体外分离出的血小板，计算 出两者的半数有效抑制浓度（IC50），与我们合成的 RWR 药物的 IC50 相比较，观 察 RWR 的作用强弱。4、RWR 对血小板聚集率影响的体内时效关系 给 药 前 心 脏 取 血 测 量 血 小 板 聚 最 大 集 率 ， 将 RWR 耳 缘 静 脉 注 射 后 ，0h,0.25h,0.75h,1h,2h 分别心脏取血，分别测量血小板最大聚集率。观察 RWR 在体内的代谢时长以及其作用时效。5、RWR 对血栓形成的影响 利用家兔动静脉血栓旁路循环模型和大鼠三氯化铁血栓模型研究 RWR 对血栓形成的影响。两种模型分别通过血栓重量和血栓内部结构变化分析 RWR 的作 用效果。6、RWR 对血液中 cGMP 含量的影响通过酶联免疫试剂盒来测定血液中 cGMP 的含量，了解血栓的变化，反映RWR 的作用效果。结果：1、 质谱分析证实 RWR 序列正确，高效液相色谱提示 RWR 的纯度 97.06%。2、 血小板聚集实验显示随着 RWR 的浓度增大，血小板最大聚集率逐渐降低。 RWR 较阿司匹林、替罗非班抗血小板聚集活性强。且与家兔血小板相比较， RWR 对人血小板聚集率作用效果更显著。3、兔子动静脉旁路循环实验表明，随着 RWR 浓度的增大，血栓重量逐渐减小 且其作用较替罗非班强。大鼠三氯化铁血栓模型显示随着 RWR 的浓度增大， 血管内的腔隙变小。4、随着给药浓度 RWR 的上升，血浆中 cGMP 的含量逐渐增大。结论：1、合成全新小肽 RWR，结构与设计相符。2、血小板聚集实验证实 RWR 在体内外均具有明显抑制血小板聚集的特性，且 与传统抗栓药物阿司匹林和替罗非班相比，RWR 抗血小板聚集效果更强。 3、两种血栓模型实验证实 RWR 可以抑制血栓形成,且其对血栓重量的影响较替罗非班强，血浆中 cGMP 含量增大，验证了 RWR 抗血栓的效果。关键词：RGD；小肽；合成；血栓；cGMPDesign and Synthesis of a small peptide RWR containing RGD and initial exploration of functionAbstractObjectivesTo Design and synthesize the small peptide RWR containing RGDTo measure the effect of RWR on platelet aggregation.To observe the effect of RWR on thrombosis.Verify RWR antithrombotic effect,to provide a theoretical basis for the research and development of antithrombotic drug containing RGD.MethodsThe design and synthesis of the small peptide RWRUsing Fmoc solid-phase synthesis of chemical method synthesized RWR.On the basis of RGD, adding a hydrophobic amino acid and a basic