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实验报告 实验项目名称：水稻愈伤组织的诱导和分化 实验项目性质：综合性实验 所属课程名称：细胞工程 班 级：14生物工程2班 学 号：201430550215 姓 名：刘明新 指 导 老 师 ：陈忠正 实验完成时间：2017年5月1日 目录 1 前言 4 2 材料与方法 4 2.1 仪器 4 2.2 设备 4 2.3 试剂 5 2.4 实验材料 5 3 实验方法 5 3.1 配母液 5 3.2 配NB诱导、分化培养基 6 3.3 高温高压灭菌 6 3.4 接种室、培养基及用具表面消毒 6 3.5 消毒剂的配制 7 3.6 种子去壳 7 3.7 外植体消毒 7 3.8 接种与观察（愈伤组织的诱导） 7 3.9 愈伤组织的再分化观察 8 4 实验结果 8 4.1愈伤组织的诱导与分化 8 4.2 实验结果分析 9 5 讨论分析 12 5.1愈伤组织的诱导问题分析 12 5.2愈伤组织再分化问题分析 12 5.3 操作分析 13 参 考 文 献 15 1 前言 在我国,愈伤组织的培养和应用已经越来越多以及成熟，如：优良植株的无性繁殖、无病毒植株的获得、优良植株的选育等等。同时，随着消费者对产品安全性要求的日益提高，植物细胞培养的应用已愈来愈广泛，如：药用代谢产物的制造、作为天然食品或者食品添加剂、杀虫剂和杀菌剂、饲料等，不仅更安全，而且能很好地解决现今产品出现的各种问题。因此，愈伤组织的培养变得更加重要，而本实验则针对由水稻胚培养出愈伤组织的诱导形成幼苗的成功率进行了研究。 愈伤组织是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。 水稻成熟胚愈伤组织的诱导和再生是组织培养中的两个关键问题，它们涉及到外植体的脱分化过程和愈伤组织的再分化过程。影响水稻胚性愈伤组织形成和植株再生能力的因素包括基因型、外源激素、渗透压、外植体来源、固化剂、培养基其它成份以及温度、光周期和继代时间等多个方面，其中材料和外源激素的种类、浓度和配比是最主要的因素。植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官分化中起着重要的作用。烧杯：100ml×1， 500ml×1 ；量筒：100ml×3， 250ml×1 ；磨口试剂瓶：100ml×1， 500ml×1；带盖试剂瓶：500ml×2；三角瓶： 100 ml×1，250 ml×1，50ml×2(无菌)，1000ml×1；培养皿：￠9cm×1；药匙；称量纸；牛皮纸；棉花塞；橡筋：若干、枪形镊：×4；无菌滤纸：（10cm×10cm）×5； 1N HCL；02N KOH；蔗糖（分析纯）琼脂粉N6大量：KNO3CaCl2·2H2O 、MgSO4·7H2O、KH2P O4 、(NH4)2SO4；B5微量：KI H3BO3、MnO4·H2O、ZnSO4·7H2O、 Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCL2·6H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O；B5有机：盐酸硫胺素盐酸吡哆醇烟酸肌醇谷氨酰胺水解酪蛋白脯氨酸2、4－D6-BA、NAA；75%酒精，2% NaCLO，无菌水(400ml)B5微量元素母液（1000×/100ml） 按配方的1000倍用万分之一天平依次称量，搅拌溶解(溶解一种后再加另一种)后定容。用量极少的成分(如CuSO4·5H2O、CoCL2·6H2O、Na2MoO4·2H2O)即使按1000倍称量仍很困难。 N6大量元素母液（10×）、B5有机成分母液（100×） 2，4-D母液(0.5mg/ml) 用万分之一天平称取2，4-D 50mg→用少量95%乙醇溶解→加水定溶为100ml6-BA母液（1mg/ml)用万分之一天平称取6-BA 100mg→用少量1N盐酸溶解→加水定溶为100mlNAA母液（1mg/m l) 用万分之一天平称取NAA 100mg→用少量95%乙醇溶解→加水定溶为100ml铁盐母液（1000×/1000ml） 用百分之一天平称取FeSO4·7H2O 27.8g， Na2EDTA 37.3g→分别置于1000ml和500ml烧怀，各加水500ml→加热搅拌，充分溶解→趁热混合，冷却装瓶。 以上各母液配好后分别装入磨口试剂瓶，贴上标签，写明名称、浓度和配制日期，置于4℃冰箱保存。NB诱导、分化培养基N6大量+B5微量+B5有机+30g/L蔗糖+500mg/L谷氨酰胺+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白+2mg/L 2,4-D+8.