动物细胞培养和核移植技术梁银铃.ppt

* * 1、卵母细胞从哪来？——屠宰场废弃的卵巢中采集到卵母细胞，体外培养到减数二次分裂中期。 2、如何去除细胞核？——用微型吸管吸去卵母细胞核和第一极体，也可用射线或某些化学药物等处理细胞破坏受体细胞核。 3、对供体牛有何要求？——优良品种 4、克隆动物的过程中实际有哪些技术支持？——动物细胞培养、核移植、胚胎移植 5、克隆牛的性别和主要性状与哪头牛相同？为什么？——性别和主要性状都与供体牛相同，因为哺乳动物的性别是由性染色体组成决定，克隆牛的染色体全都来自供体牛，因此相同；主要性状由细胞核中遗传物质决定的，因此也与供体牛相同。 6、克隆牛的性状与供体牛完全相同吗？为什么？——不完全相同，一方面去核卵细胞质中带有少量的DNA，其控制的性状与供卵的细胞相同；另一方面，生物的表现型是由基因型与环境因素共同作用的结果，环境不同，表现型也可能不同。 7、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？——因为动物细胞培养在10代以内一般能保持正常核型，而传代到10代以上，则有可能出现变异的核型，遗传物质发生改变，不利于全能型的表现。 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植。 2.2动物细胞工程 植物组织培养 植物体细胞杂交 回顾： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 想一想： 1.动物细胞培养的基本原理是什么？ 原理：细胞增殖（有丝分裂） 2.动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养的结果：使细胞数目增多。 结合图2-16，阅读P44最后一段至P46第一段结束。 1、找出关键词并理解它们的含义。 2、叙述动物细胞培养的过程。 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 1、动物细胞培养过程中几个重要的概念 （1）细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上（单层）。要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖—细胞出现接触抑制。 哪些细胞失去了接触抑制？ 传代培养时，少数超过50代的细胞，由于遗传物质发生改变，可无限增殖，并失去了接触抑制——肿瘤细胞。 （2）接触抑制 动物细胞培养特点： 贴壁生长、接触抑制。 突变的细胞，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。 细胞 悬浮液 细胞贴满瓶壁 50代 细胞 原代 培养 传代 培养 （3）原代培养: 将动物组织经胰蛋白酶等处理后的初次培养。（4）传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 动物组织块 细胞悬浮液 胰蛋白酶／胶原蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 转入培养液（装瓶） 剪碎 贴满瓶壁的细胞 分散、分瓶 胰蛋白酶／胶原蛋白酶 2.过程：P45 动物组织块 细胞悬浮液 胰蛋白酶／胶原蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 转入培养液（装瓶） （分解细胞间的蛋白质） 剪碎 贴满瓶壁的细胞 分散、分瓶 胰蛋白酶／胶原蛋白酶 2.过程： 部分细胞的核型可能变化，遗传物质未改变 遗传物质改变（不死性） 通常取动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 因为其分化程度低、增殖能力强，更容易培养。 说明细胞与细胞间的主要物质是蛋白质 1. 动物细胞培养对培养的材料有要求吗？ 3. 用胰蛋白酶处理，组织就会分散成单个细胞，说明了什么？ 2. 为什么在培养前要将组织分散成单个细胞？ 成块的组织不利于培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养。 4.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间。 5.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞。 10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型； 而10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化， 有少部分还发生突变向癌细胞方向发展。 正常细胞在分裂时，只要和相邻细胞接触，就停止活动，不再分裂。这一现象称为“接触抑制”。对这一事实的有关推测，正确的有 （ ） A．动物体细胞培养过程中，在遗传物质发生变化以后，只能形成单层细胞。 B．癌细胞在体外培养时，不可能成为隆起的多层细胞。 C．癌细胞不受“接触抑制”，这可能与它的细胞表