流感病例采样培训课件.ppt

甲型H1N1流感病例标本采集和实验室检测 一、病原学 流行性感冒病毒属于正粘病毒科。 正粘病毒的核酸分节段。 正粘病毒科仅有一个种，即流行性感冒病毒，简称流感病毒。流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，是流行性感冒的病原体。 甲型流感病毒除了感染人外，还可引起禽、猪等多种动物感染。由于该病毒抗原性易发生变异，曾多次引起世界性大流行，例如，1918~1919年的大流行中，全世界至少有2000万人死于流感。乙型流感病毒仅感染人且致病性较低。丙型流感病毒只引起人类不明显或轻微的上呼吸道感染，很少造成流行。甲型流感病毒于1933年分离成功。 形态与结构：形态多为球形，直径为80~120nm，初次从患者体内分离出的病毒有时呈丝状或杆状。 流感病毒核酸为分节段的单负链RNA，由核心和衣壳组成的核衣壳呈螺旋对称，有包膜，表面有刺突。 核心：流感病毒RNA分节段，甲型和乙型由8个节段、丙型由7个节段组成。各片段的长度在890~2341bp之间。由于病毒分节段复制，病毒成熟时再重新装配于子代病毒体中，所以病毒在复制过程中极容易发生基因重组而导致新病毒株的出现，这也是流感病毒易发生变异的主要原因。每个基因节段分别编码不同的蛋白质。1~6片段分别编码PB2、PB1、PA、HA、NP和NA单个蛋白，第7片段编码M1和M2两个蛋白，第8片段编码NS1和NS2两个蛋白。 核蛋白（NP）：是病毒的主要结构蛋白，构成病毒衣壳，它与3种RNA多聚酶复合体（PB1、PB2、PA）一起与RNA节段相连形成核糖核蛋白（RNP），即为核衣壳，呈螺旋对称排列。核蛋白抗原结构稳定，很少变异，与M蛋白一起决定病毒的型特异性，但其抗体没有中和病毒的能力。 包膜：病毒体的包膜由两层组成，内层为基质蛋白M1，其抗原结构较稳定，具有型特异性，但相应抗体不具有中和病毒的能力，而在增加病毒包膜的韧性与完整性方面起重要作用。包膜外层来源于宿主细胞膜的脂质双层膜，M2为嵌于包膜中的膜蛋白，形成膜通道，利于脱壳及HA的产生。 刺突：流感病毒的包膜上镶嵌有两种刺突，即血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA），均以疏水末端插入到脂质双层中。血凝素的数量较神经氨酸酶多，大约为4∶1~5∶1。 血凝素（HA）：呈三棱柱形，糖蛋白成分，占病毒蛋白的25%。HA为三聚体，每条单体前体（HA0）由HA1和HA2通过精氨酸及二硫键连接而成，当精氨酸被细胞蛋白酶裂解而形成仅由二硫键连接的HA1和HA2时，病毒才有感染性。 HA1是同红细胞、宿主细胞受体（唾液酸）相结合的部位，因而与感染性有关； HA2具有膜融合活性，促使病毒包膜与胞饮细胞膜的融合并释放核衣壳。HA抗原结构易发生改变，是划分甲型流感病毒亚型的主要依据。 二、卫生部办公厅关于印发《人感染甲型H1N1流感预防控制技术指南（试行）》的通知 标本采集和检测 1、标本采集：按照本指南的应急监测方案（附件2）要求，采集相关标本进行检测。具体标本采集类型、方法参见《全国流感/人禽流感监测实施方案》的“流感监测实验技术操作规范”。 2、标本检测：标本检测方法和流程参见附件3《人甲型H1N1流感病例标本采集和实验室检测指南（暂行）》。 3、生物安全要求：甲型H1N1流感病毒培养应在具有资质的BSL-3实验室中进行，标本储存、包装和运送应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（中华人民共和国卫生部第45号令）等有关规定执行。 三、附件3.甲型H1N1流感病例标本采集和实验室检测指南（暂行） 甲型H1N1感冒病毒的检测：所有甲型H1N1感冒疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测甲型H1N1感冒病毒。 推荐采集的呼吸道标本：疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液（VTM），并立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上运送至实验室。临床样品收集人员及实验室人员的感染控制指导请见相关文件。 （1）拭子：理想的情况下，标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含2毫升病毒运输液（例如，含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）。 （2）临床标本储存：所有呼吸道标本应保存在4℃，并尽快放置在-70℃。如果没有-70℃冰箱，标本应保存在4℃，但不应超过4天。 （3）临床标本运输：临床标本应按照A类包装要求运送，并用干冰运输。所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。 （3）检测程序：呼吸道标本应首先应用real ti