高效液相气相相关维护保养剖析.docx

液相工作原理：色谱仪原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相(气体、液体)通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。液相色谱柱的正确使用影响色谱柱使用寿命的主要因素流动相因素①流动相pH?不同基质的填料具有不同的pH适用范围。②?流动相变质?当前使用最为广泛的是硅基键合相填料,当以水溶液作为流动相或流动相中含有一定浓度的磷酸盐缓冲液时,水溶液中或缓冲盐溶液中会滋生出一些细菌或霉菌,从而堵塞固定相颗粒间的空隙。特别是对于多元自动比例混合的高效液相色谱仪来说,水相或缓冲盐相独立存贮,因存放时间较长而容易发生此类问题。③?流动相纯度?如流动相含有微量不溶性杂质颗粒,则很容易在柱头部位被截留,久而久之,造成色谱柱机械性堵塞,引起柱压升高而无法正常使用。④?其它因素?如流动相的极性对柱子也有一定影响样品因素①样品的溶解性?样品试样在配制中,如有少量微粒未能完全溶解,则会随试样一起进入色谱柱,同样会沉积在柱头处,造成色谱柱的堵塞。②样品的纯度?样品中可能含有待分析组分以外的各种组分或杂质,这些组分或杂质可能会在柱内产生不可逆吸附,从而使固定相的活性点被覆盖,保留特性发生变化。③样品的化学性质?待测试样中的各种组分与填料之间应具有化学稳定性其它因素?如柱压的影响,温度的影响,色谱柱的正确冲洗,色谱柱的正确安装等。高效液相色谱柱的正确使用加装保护柱过滤流动相和样品?净化样品??避免过高的柱压?避免的方法是(1)柱压过高时,尽可能采用较小的流速,以不超过柱最大允许压力的一半为宜。(2)当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。(3)使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时,柱切换要避免在高压下进行。注意温度和酸碱度?目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～10,但在实际使用时应避免极端的pH条件,特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用,如必须要在极端的pH条件下使用时,可通过以下方法避免柱损害:(1)在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相(2)降低使用温度(3)检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”彻底清洗。正确及时的冲洗?开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱,如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶,如不能混溶,要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。异丙醇是唯一能与各种溶剂混溶的试剂,可作为中介流动相使用。反相键合硅胶柱适宜的保存环境是纯甲醇色谱柱维护1.色谱柱堵塞原因1：溶剂中的不溶物?—??应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm）??原因2：样品中的不溶物?—??应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm）?原因3：泵，进样器等中的不溶物?—??在泵和进样器之间安装内置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器?u原因4：柱内不溶物的形成?4-1．由于溶剂的不互溶而产生的沉淀?—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱? 4-2．在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀?????—检查样品液和流动相是否互溶?4-3．由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀?—将色谱柱密封紧，并保持室温恒定2.操作压力上升故障排除??HPLC系统流程图：?吸入过滤器泵内置过滤器进样器预过滤器保护柱主分析柱检测器和排放系统?从流程图的末端依次断开部件，如从检测器开始断开，最容易引起阻塞的部件是：预过滤器，保护柱和主分析柱?[注]：应记录新柱子在常规分析条件下的操作压力3.柱堵塞的修复???步骤1：使用含盐缓冲液后（如离子对试剂）应用溶解性强的溶剂（如水）进行冲洗?步骤2：先断开检测器，然后用对来自样品中的物质有强溶解性的溶剂进行冲洗。对于反相色谱柱，可使用甲醇，乙睛，四氢呋喃，氯仿，庚烷等，在此条件下，应避免溶剂的pH低于2或高于8?若经过步骤1和步骤2后，压力仍没下降至步骤3?步骤3：断开检测器，将色谱柱反方向放置，然后检查柱压?（1）?若压力稳定下降，至步骤4?（2）?若压力不下降，至步骤5?步骤4：保持色谱柱反方向连接，用低于0.5?ml/min?流速冲洗1小时?若步骤4不能降压，至步骤5?步骤5：若内置过滤器被堵塞，应冲洗或更换。柱连接端的拆卸或重装会导致柱效下降，（有效塔板数下降和不对称