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鹅巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗研制 　　摘要：为了有效控制霍尔多巴吉鹅巴氏杆菌病（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌｏｓｉｓ）的发生，将内蒙古通辽地区分离鉴定的巴氏杆菌作为菌种，采用液体增菌培养后灭活，加入佐剂制成油乳剂灭活疫苗，经无菌和安全检验合格后免疫２０日龄雏鹅（０．５ ｍＬ／只）。结果表明，该疫苗免疫效果良好，１次免疫后保护率达７３．３％，２次免疫后保护率达９６．７％。 　　关键词：巴氏杆菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）；霍尔多巴吉鹅；疫苗 　　中图分类号：Ｓ８５８．２９９；Ｓ８５２．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）05－0965-03 　　 　　Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｏｉｌ－ａｄｊｕｓｔ Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｖａｃｃｉｎｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｇｏｏｓｅ Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ mｕｌｔｏｃｉｄａ 　　 　　ＷＡＮＧ Ｘｕｅ－ｌｉ１，２，ＹＡＮ Ｃｈａｎｇ－ｑｉｎｇ２，ＬＩＵ Ｋｅ－ｆｅｉ２，ＹＡＮＧ Ｍｉｎｇ２，ＹＡＮＧ Ｍｉｎｇ－ｘｉａ１ 　　（１． Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ， Ｔｏｎｇｌｉａｏ ０２８０４２， Inner Mongolia，Ｃｈｉｎａ； 　　２．Ｔｉａｎｊｉｎ Ｓｈｅｎｇｊｉ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３００３８４， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｏｌｚｅｒ ｂｕｇｇｙ ｇｏｏｓｅ， ｔｈｅ ｏｉｌ－ａｄｊｕｓｔ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｏｆ Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｔｏｎｇｌｉａｏ ｗａｓ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｔｏ ２０－ｄａｙ－ｏｌｄ Ｈｏｌｚｅｒ ｂｕｇｇｙ ｇｏｏｓｅ at ａ ｄｏｓｅ ｏｆ ０．５ ｍＬ ａｆｔｅｒ ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔ???ａｔ ｔｈｅ ｖａｃｃｉｎｅ ｗａｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ｗｉｔｈ a ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ７３．３％ ａｆｔｅｒ ｉｎｉｔｉａｌ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ９６．７％ ａｆｔｅｒ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ； Ｈｏｌｚｅｒ ｂｕｇｇｙ ｇｏｏｓｅ； vａｃｃｉｎｅ 　　 　　鹅巴氏杆菌病（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌｏｓｉｓ）是由禽多杀性巴氏杆菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）引起的一种鹅的急性、败血性、高度接触性传染病。常引起鹅的急性败血症及组织器官出血性炎症，其特征是高热、下痢、呼吸困难［１］。巴氏杆菌血清型较多，采用药物防控效果比较好，但停药一段时间又复发，造成经常用药，易产生抗药性，增加饲养成本，故疫苗的免疫接种是预防该病的一种较好的办法。本研究旨在探讨霍尔多巴吉鹅内蒙古通辽地区巴氏杆菌分离株油乳剂灭活疫苗的制备和对鹅的免疫保护效果，为该病的预防提供一种方法。 　　１ 材料与方法 　　１．１ 病料 　　２０１１年８月中旬，内蒙古通辽某养殖场送检的霍尔多巴吉商品鹅病、死鹅。 　　１．２ 菌株分离鉴定 　　１．２．１ 分离培养 将肝、肺、脾等病料无菌接种于鲜血琼脂平板、麦康凯琼脂平板，３７ ℃培养１８～２４ ｈ，挑取单个菌落，进行纯培养并鉴定。 　　１．２．２ 菌株鉴定 挑取上述纯培养菌落抹片，瑞氏、美蓝和革兰氏染色，镜检。 　　１．２．３ 细菌生化试验 将纯化好的疑似巴氏杆菌菌株分别接种于尿素、精氨酸、明胶、葡萄糖、蔗糖、半乳糖、果糖、甘露醇、鼠李糖、乳糖、肌醇、菊糖、ＭＲ、Ｖ－Ｐ、Ｈ２Ｓ、石蕊牛乳等生化培养基，３７ ℃培养２４～４８ ｈ，观察结果，同时与标准菌株进行比较。 　　１．３ 动物试验 　　用灭菌生理盐水与病死鹅肝、脾组织研磨，制成１０％悬液，接种于１０只小白鼠皮下，每只０．２ ｍＬ，观察小鼠死亡时间，取鼠肝、脾等脏器涂片染色，镜检。 　　１．４ 巴氏杆菌悬液的制备与灭活 　　选定菌株接种于血液琼脂培养基上，３７ ℃培养１８ ｈ，挑取培养物接种于马丁肉汤（含０．１％血红素，１．０％血清）培养基中，３７ ℃振荡培养１８ ｈ，纯度检查后作为种子液。然后将合格的种子液按照１０％的比例再接种于制苗用的马丁肉汤中，３７ ℃振荡培养２４ ｈ，收集菌液。在培养过程中每４ ｈ振摇１次，菌液培养经纯度检查合格后计数，保证含菌量达到