苦豆和狼牙刺种子中苦参碱与氧化苦参碱含量分析比较.docVIP

苦豆和狼牙刺种子中苦参碱与氧化苦参碱含量分析比较 　　摘要建立分析测定苦豆和狼牙刺种子中苦参碱与氧化苦参碱含量的高效液相色谱法,并对其含量进行测定、分析、比较。结果表明:该色谱法能用于苦豆和狼牙刺种子中苦参碱和氧化苦参碱含量检测,并测得其含量在苦豆和狼牙刺种子中各有优势;狼牙刺种子在氧化苦参碱制备方面有利用价值。 　　关键词苦豆;狼牙刺种子;苦参碱;氧化苦参碱;含量 　　中图分类号R284.1文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)11-0017-02 　　 　　苦豆(Sophoraalopecuroides L. )为豆科植物苦参的种子,又名苦参实、苦参子。广泛分布于我国青海、甘肃、陕西、宁夏、内蒙古等省区。主要含有苦参碱、氧化苦参碱,具有清热燥湿、杀虫、利尿等功效[1-2]。 　　狼牙刺(Sophora viciifolia H.)为豆科槐属多年生灌木,又名白刺花,广泛分布于我国的河北、山西、陕西、甘肃、河南、四川、云南、贵州等省区。狼牙刺作为一种秦巴地区广泛使用的民间药材,已有悠久的历史。据检测分析,其种子中含有苦参碱(Matrine)、氧化苦参碱(Oxymatrine)等多种生物碱[3-5]。 　　现代药理研究表明,以苦参碱、氧化苦参碱为代表的苦参类生物碱具有抗炎、保肝、抗肿瘤、抗心律失常、免疫调节和升高白细胞等作用[6-11]。汉中为苦豆和狼牙刺的适宜生长区之一,野生资源十分丰富。本文采用高效液相色谱法,对汉中野生苦豆和狼牙刺种子中的苦参碱、氧化苦参碱含量进行了测定、分析,旨在建立一种分析测定苦豆和狼牙刺中苦参碱与氧化苦参碱的高效液相色谱法,并探讨苦参碱与氧化苦参碱含量的差异,为合理开发利用苦豆和狼牙刺种子资源提供科学依据。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1供试材料 　　苦豆和狼牙刺种子均采自陕西省汉中市西乡县桑园镇,于105℃烘箱内烘干、粉碎,过40目分样筛,备用。 　　 　　1.2仪器 　　液相色谱仪(Agilent 1100,安捷伦公司);超声波清洗仪(SK-120E,宁波科生仪器有限公司);紫外-可见分光光度计(UV-2550,岛津公司);超纯水器(TTL-10A,北京同泰联科技发展公司);电热恒温鼓风干燥箱(山东潍纺医药集团股份有限公司医疗器械厂);中草药粉碎机(FW117,天津市泰斯特仪器有限公司);十万分之一分析天???(AUW220D,岛津公司);万分之一电子天平(FA2004N,上海分析仪器);恒温水浴锅(HWS-5A,北京东方精瑞发展有限公司)。 　　 　　1.3试剂 　　甲醇为色谱纯;氨水、氯仿、磷酸为分析纯;水为超纯水;对照品苦参碱(110805-200306)、氧化苦参碱(0780-200004)购于中国药品生物制品检验所。 　　 　　1.4色谱条件 　　色谱柱ZORBAX -C18柱(4.6mm×150mm,5μm);检测波长为220nm;流动相为0.04 moL/L磷酸-甲醇(90∶10);流速为1.0mL/min;柱温为20℃。 　　 　　1.5对照品溶液的制备 　　分别精密称定苦参碱对照品2.4mg和氧化苦参碱对照品10.8mg,用超纯水定容至10mL容量瓶中,制成含苦参碱2.4μg/mL及氧化苦参碱10.8mg/mL的混合对照品母液。 　　1.6供试品溶液的制备 　　精密称取试验材料0.5g,置于60mL具塞三角瓶中,加入2mL浓氨水使样品润湿,再加入30mL氯仿,超声提取30min,静置4h,滤出上清液后再加氯仿超声提取,共提取3次。合并3次滤液,80℃水浴回收氯仿至干。残留物以超纯水溶解,并定容于25mL容量瓶。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1检验波长选择 　　取苦参碱和氧化苦参碱对照品适量,分别用超纯水配成标准溶液,在UV-2550紫外-可见分光光度计上于190~900nm进行扫描。结果显示,苦参碱和氧化苦参碱在220nm处有最大吸收,试验采用220nm为检验波长。 　　 　　2.2出峰时间确定 　　在上述色谱条件下,分别进1.5中配制的标准溶液各10μL,检测得苦参碱在4min处出峰,氧化苦参碱在9min处出峰。 　　 　　2.3线性关系的考察 　　精密量取混合对照品母液0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00 mL、3.00mL用超纯水定容至5.0mL容量瓶,得到苦参碱浓度梯度为12μg/mL、24μg/mL、48μg/mL、96μg/mL、192μg/mL和氧化苦参碱浓度梯度为54μg/mL、108μg/mL、216μg/mL、432μg/mL、648μg/mL的一组混合对照品溶液。经0.45μm微孔滤膜滤过,在色谱设定条件下依次进样10μL测定苦参碱、氧