微生物转化井冈霉素制备假氨基糖类α-糖苷酶抑制剂研究.pptVIP

微生物转化井冈霉素制备假氨基糖类α-糖苷酶抑制剂的研究 主要内容 一. 绪论及立体依据 二. 井冈胺标准品的制备及其分析方法的研究 三. 井冈胺转化菌株的筛选 四. 菌株的分类鉴定 五. 液体发酵工艺的优化 六.结论、展望及致谢 一.绪论及立题依据 1.1糖尿病概述 由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱，伴有因胰岛素分泌或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢异常。 一.绪论及立题依据 Ⅱ型DM的主要致病机制是组织对胰岛素抵抗(insulin resistance，IR) 一.绪论及立题依据 一.绪论及立题依据 一.绪论及立题依据 一.绪论及立题依据 一.绪论及立题依据 α-糖苷酶抑制剂的抗HIV功能 使HIV包膜糖蛋白前体因在内质网内进行N-糖基化时发生错误折叠而停留在内质网，干扰病毒的组装 α-糖苷酶抑制剂与肿瘤 血管瘤的生成需要特定的细胞寡糖，抑制剂改变内细胞上与之相关的某些结构，有抑制肿瘤生长的可能 一.绪论及立题依据 井冈霉素(Jinggangmycins)又被称为有效霉素(validamycins)，是上海农药研究所沈寅初等于1972年开发出的一种农用抗生素，由从我国井冈山地区土壤中分离的微生物—吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces. hygroscopicus var. jinggangensis)代谢产生 一.绪论及立题依据 一.绪论及立题依据 一.绪论及立题依据 一.绪论及立题依据 新型降糖药物的开发 微生物水解井冈霉素生产井冈胺 井冈胺制备、分离纯化及检测方法的建立 首次发现芽孢杆菌Bacillus oleronius 水解井冈霉素 为中试发酵提供了实验基础 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 2.3.1 井冈胺的TLC检测 展开剂A ：乙酸乙酯：乙酸：水=3:1:1 展开剂B ：正丁醇：乙醇：水：吡啶=35:15:40:10 展开剂C ：正丙醇：乙酸：水=4:1:1 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 2.3.2.1 衍生化反应条件的确立 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 反应温度对衍生化结果的影响 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 反应时间对衍生化结果的影响 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 2.3.2.2 井冈胺HPLC条件的确立 不同色谱柱对转化产物衍生物分离效果的影响 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 不同流动相比例对转化产物衍生物分离效果的影响 流动相A ：乙腈：水=12：:88 流动相B ：乙腈：水=15：:85 流动相C ：乙腈：水=17：:83 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 二.井冈胺标准品的制备及其分析方法的建立 2.4 小结 732阳离子交换树脂和DOWEX 1×2阴离子交换树脂联用可以很好的从水解液中分离并纯化出井冈胺。水解产物经鉴定后确定为井冈胺。 对影响衍生化反应结果的温度、反应时间两个因素做了初步研究。 确立的井冈胺的TLC和HPLC分析方法，分离效果良好。 三. 井冈胺转化菌株的筛选 3.1 实验流程 采集土样（上海市奉贤区海湾镇农田及崇明县建设镇稻田 ） 土样优选 微生物初筛（TLC） 复筛（HPLC） 菌株鉴定（形态学、生理生化、分子生物学） 三. 井冈胺转化菌株的筛选 3.2 土样优选 液体筛选培养基：井冈霉素15g，硫酸铵10g，硫酸氢二钾7g，硫酸二氢钾3g，无水硫酸镁0.1g，水1000ml。 三. 井冈胺转化菌株的筛选 3.3 初筛 三. 井冈胺转化菌株的筛选 3.4 复筛 三. 井冈胺转化菌株的筛选 3.5 菌体形态 三. 井冈胺转化菌株的筛选 三. 井冈胺转化菌株的筛选 三. 井冈胺转化菌株的筛选 3.6小结 井冈霉素作为唯一碳源的培养基，省时、高效 细菌菌落形态、大小、颜色非常类似，无法利用形态学方法区分 。实际菌株数量可能较少 经历菌体-芽孢-再次萌发菌体的过程 芽孢杆菌分解井冈霉素产井冈胺属首次发现 四. 菌株的分类鉴定 四. 菌株的分类鉴定 4.1 实验流程 分子生物学鉴定：DNA抽提→→电泳检测→→ PCR扩增→→产物测序→→BLAST对比及进化关系分析 生理生化检测：考察菌株Vali-2的革兰氏染色情况，菌株产生淀粉酶、蛋白酶、过氧化氢酶的能力以及菌株分解硝酸盐、柠檬酸盐和葡萄糖等11项指标与文献对比 四. 菌株的分类鉴定 4.2 测序结果及BLAST对比 四. 菌株的分类鉴定 四.