甲壳素载体支架的生物相容性和对角膜上皮损伤的修复分析-biocompatibility of chitin carrier scaffold and repair analysis of corneal epithelial damage.docxVIP
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甲壳素载体支架的生物相容性和对角膜上皮损伤的修复分析-biocompatibility of chitin carrier scaffold and repair analysis of corneal epithelial damage
独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他 人 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 研 究 成 果 , 也 不 包 含 未 获 得(注:如没有其他需要特别声明的,本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字日期:年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,并同意以下 事项:1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许 论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中 国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入 CNKI《中国知识资源总库》,授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(必威体育官网网址的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名: 导师签字:签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月甲壳素载体支架的生物相容性和对角膜上皮损伤的修复研究摘要目的:角膜是眼球的第一道屏障,对维持视觉具有极其重要的作用。角膜上 皮细胞的稳态对于维持眼表完整和视觉功能具有极其重要的作用,角膜上皮受损 会影响人的正常生活,尤其当角膜缘受损严重时,角膜上皮无法再生修复,因此 需要选择合适而有效的方法重建角膜上皮层。目前常用组织工程的方法构建角膜 上皮层,然而组织工程角膜载体支架材料的应用受到柔韧性、降解速率、免疫排 斥反应等的限制,因此选择一种安全无毒性、柔韧性好、降解速率合适、免疫排 斥反应低且易获取的材料成为目前组织工程角膜支架材料研究的热点。甲壳素具 有抑菌性、能促进细胞新陈代谢,并能提高机体免疫力等功效,而且无毒副作用, 无免疫原性,在生物医用材料方面有很多应用。方法:本研究以甲壳素为主要材料,主要进行了以下实验研究:1、甲壳素性质、甲壳素混合膜制备及理化性质测定:对甲壳素分子量、脱 乙酰度以及红外结构表征等理化性质进行测定;将甲壳素与硫酸软骨素按一定比 例制备甲壳素混合膜,并对其厚度、含水量、透光率、机械性能等理化性质进行 测定;2、甲壳素混合膜生物相容性:将甲壳素混合曲率膜片贴附于新西兰大白兔 眼表,通过对其眼部的定时观察来了解共混膜对兔眼的刺激反应;通过 MTT 法 评价甲壳素混合膜的细胞毒性,并用扫描电镜观察细胞在混合膜上的生长贴附情 况;将混合膜植入大鼠皮下和腿部肌肉观察其体内降解情况和组织相容性。3、载细胞混合膜对角膜上皮损伤的修复作用:将载细胞甲壳素混合曲率膜 移植到受损的兔角膜上皮层表面,定时进行荧光染色观察其修复情况,并对修复 后的角膜上皮层进行病理学和扫描电镜观察。结果: 1、本文主要研究材料为脱乙酰度相对较低的大分子量甲壳素,其脱乙酰度为 19.33%,分子量为 2×106KD,并确定了甲壳素混合平面膜和曲率膜的制备方 法。制备的甲壳素混合膜厚度在 0.2mm 左右;在 400-800nm 之间的透光率均大于 80%;含水量为 81.59%,与人角膜基质含水量接近;干态下拉伸强度达到14.925 MPa,湿态下拉伸强度为 3.28 MPa,与人眼角膜湿态抗张强度 (4MPa) 较 为接近。2、甲壳素混合膜对兔眼无刺激反应,无细胞毒性,细胞相容性好,并能促 进角膜上皮细胞在混合膜上的增殖生长。体内降解时间相对较慢,皮下为 22w, 肌肉处为 18w,组织相容性好,炎症反应小,说明该材料具有良好的生物相容性。 3、与对照组相比载细胞甲壳素混合膜能加速角膜上皮细胞的损伤修复速率,且修复后的角膜上皮层结构致密整齐。 结论:以甲壳素和硫酸软骨素为材料制备的组织工程角膜载体支架材料基本符合组织工程角膜材料的要求,为组织工程角膜载体支架材料的研究奠定了重要 基础。关键词:甲壳素;组织工程;角膜上皮细胞;损伤修复Biocompatibility of Chitin Carrier and Its Effect onWound Healing of Corneal Epithelium AbstractPurpose:The cornea is the eyes outermost lens, which plays a very important role in maintaining the vision. Cornea functions like a barrier
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