生化试验教材实验三：琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制.pptVIP

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2018-05-23 发布于天津
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生化试验教材实验三：琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制.ppt

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生化试验教材实验三：琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制.ppt

实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制刘向华南京医科大学生化与分子生物学系 Nanjing medical university Department of biochemistry and molecular biology 一、目的与要求：了解琥珀酸脱氢酶(enzyme)的作用及酶促反应中的竞争性抑制作用(competitive inhibition) 二、实验原理： 1、肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变为延胡索酸（三羧酸循环，线粒体）。 2、反应中生成的FADH2可使甲烯蓝还原为甲烯白。 3、丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂 4、本实验以甲烯蓝为受氢体，在隔离空气条件下，以甲烯蓝褪色程度来观察、判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。浓度琥珀酸琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸三、操作步骤： 1、酶提取液的制备　1 g 兔肌肉、剪碎＋海沙（研磨成糜状）　＋12 ml 1/15M磷酸盐缓冲液 (区别于0.1mol/L) （两次，研成糊状）；纱布过滤１２３４５酶提取液 20 20 20 20 - 0.2 mol/L琥珀酸 4 4 4 - 4 0.02mol/L琥珀酸 - - - 4 - 0.2 mol/L丙二酸 - 4 - 4 - 0.02mol/L丙二酸 - - 4 - - 蒸馏水 4 - - - 24 0.02%甲烯蓝 2 2 2 2 2 试剂（滴）２、酶促反应及竞争抑制作用 3、各管混匀，加石蜡5滴隔绝空气， 37℃水浴保温，观察褪色情况。（斜执试管，沿壁缓慢加，不要产生气泡）　