流感疫苗生产及研究进展教学讲义.pptVIP

单价原液制备 毒种和病毒尿囊液制备 毒种MOI 接种量 温湿度 培养时间 通风 温度 时间 颜色 量 选胚 接种 培养 收获 纯化 裂解 产品名称 检定项目 药典标准 主代种子 无菌检查 无菌生长 血凝滴度 不低于1：320 支原体检查 符合规定 鉴别试验 采用交叉血凝抑制法， P/N不低于8 病毒滴度 不低于6.5Lg EID50/ml 外源性禽白血病病毒检测 阴性 外源性禽腺病毒检测 阴性 工作种子 无菌检查 无菌生长 血凝滴度 不低于1：320 支原体检查 符合规定 鉴别试验 采用交叉血凝抑制法， P/N不低于8 病毒滴度 不低于6.5Lg EID50/ml 质量控制 中间产品质量控制 中间品 检定项目 长春公司企业注册标准 病毒收获液 微生物限度 105CFU/ml 沙门氏菌 阴性 血凝滴度 ≥1:160 细菌内毒素 10EU/ml 蛋白含量 ≤3.5mg/ml 病毒浓缩液 蛋白含量 ≤10mg/ml 细菌内毒素 160EU/ml 病毒纯化液 蛋白含量 ≥2.0mg/ml 病毒裂解纯化液 蛋白含量 ≥0.5mg/ml 病毒灭活纯化液 细菌内毒素 ＜0.2EU/ugHA 灭活验证实验 符合规定 微生物限度 10CFU/ml 单价病毒原液质量控制 单价病毒原液 检定项目 长春公司企业 注册标准 鉴别实验 抗原性与推荐的病毒株相一致 血凝素含量 ≥90ug/ml 蛋白含量 不高于血凝素含量的4.0倍 无菌检查 符合规定 病毒裂解效果检查 病毒颗粒应裂解完全。每次更换流感病毒毒株后生产的前三批单价病毒液须进行该项检查。 某些病毒能够与人或动物的红细胞发生凝集，这称之为红细胞凝集反应（HA）。这种凝集反应被加入的特异性血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（HI）。 血凝和血凝抑制试验 内容 病毒性灭活疫苗概述 1 流感和流感病毒 2 流感疫苗生产工艺 3 3 流感疫苗研发 4 4 病毒性灭活疫苗概述 定义及分类 病毒接种和培养 采用物理或化学的方式将病毒灭活 其他的生产步骤 成品 培养基质 流感疫苗：鸡胚 出血热及森脑疫苗：原代地鼠肾细胞 狂犬疫苗：Vero 细胞 灭活方法： 加热 灭活剂（福尔马林等） 纯化：纯化全病毒疫苗 裂解：裂解疫苗 亚单位：亚单位疫苗 纯化全病毒疫苗： 冻干人用狂犬病疫苗 出血热、森脑 ----含氢氧化铝佐剂 裂解：流感病毒裂解疫苗 灭活疫苗：称死疫苗，是指利用加热或甲醛等理化方法将人工大量培养的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持免疫原性，并结合相应的佐剂而制成的疫苗。 长春公司的病毒性灭活疫苗 工艺流程 名称 病毒培养 病毒纯化 病毒裂解 病毒灭活 半成品配制及分包装 冻干人用狂犬病疫苗 基质：Vero细胞培养 方式：生物反应器 超滤浓缩； 柱层析（分子筛） 无 灭活剂：β-丙内酯 冻 干 双价肾综合征出血热疫苗 森林脑炎灭活疫苗 基质：原代地鼠肾细胞 方式：转瓶 超滤浓缩； 柱层析（分子筛） 无 灭活剂：甲醛 含铝佐剂 流感病毒裂解疫苗 基质：鸡胚 方式：孵化间 超滤浓缩； 蔗糖密度区带离心 裂解剂： Triton X-100 灭活剂：甲醛 无硫柳汞 两种灭活剂的比较 简要介绍 灭活机理 优缺点 甲醛 甲醛，化学式HCHO，称蚁醛。无色气体，有特殊的刺激气味，对人眼、鼻等有刺激作用。 既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基（如A,G,U），又可作用病毒壳蛋白。 1）病原体蛋白的抗原性严重破坏，可能有病原体存活； 2）灭活时间长； 3）易受温度、pH、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响； 4）残留的游离甲醛，注入机体后，会产生制激性反应。 β-丙内酯 一种杂环类化合物(C3H4O2)，沸点155℃，常温下是无色粘稠状液体，对病毒具有很强的灭活作用。 作用于病原体DNA或RNA，改变病毒核酸结构达到灭活目的，而不直接作用于蛋白。? 1）不破坏病毒的血凝素抗原, 保持病毒良好的免疫原性； 2）灭活时间短； 3）其水解产物对机体无害，接种反应轻。 常用的裂解剂 简要介绍 机理 Triton X-100 聚乙二醇辛基苯基醚,是一种非离子型表面活性剂（或称去污剂） 它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。 Triton N-101 聚乙二醇(壬基苯基)醚,是一种非离子型表面活性剂（或称去污剂） 溶解脂质 CTAB 十六烷基三甲基溴化铵,阳离子表面活性剂，是一种阳离子去污剂 与非离子及两性离子表面活性剂有良好的配位性，对多种油脂具较好的乳化作用, 有轻微脱脂作用. 流行性感冒（Influenza）即流感，是由甲（A）、乙（B）、丙（C）三型流感病毒分别引起的急性呼吸道传染病。常造成不同程度的流行，