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核酶 酶工程与蛋白质工程 知识介绍.ppt
第十章 核 酶; 天然核酶 功能性核酸的体外选择 脱氧核酶 核酶/脱氧核酶的催化潜能核进化策略;一、天然核酶;1、 锤头型核酶;;2、 发夹型核酶;; RNase P是一种核蛋白复合物,它可以在体内特异性地剪切tRNA前体的5’末端,形成成熟的tRNA。大肠杆菌来源RNaseP包括一个377nt的RNA催化活性单位(M1 RNA)和一个约119氨基酸的碱性蛋白,二者均为RNase P体内活性所必需。;;4、组I内含子和组II内含子;二、功能性核酸的体外选择;1、基本思想和方案;2、适体的筛选;;;功能性核酸序列的冗余性; 一般适体结合配基的部位是富含嘌呤的环状序列，这些序列中非规范的碱基对之间的相互作用形成了特定的空间结构和精确的氢键受体和供体的位置与取向，实现了与配基的高亲和性、高特异性的相互作用。不规则链的排布以及交叉螺旋之间的相互作用稳定了适体的活性构象。;3、核酶的体外选择;筛选具有RNA连接酶活性的核酶;三、脱氧核酶;2、脱氧核酶的发现 1994年，Gerald FJ.等报道了一个人工合成的35bp的多聚脱氧核糖核苷酸能够催化特定的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸形成磷酸二酯键，并将这一具有催化活性的DNA称为脱氧核酶或DNA酶。 1995年，Cuenoud等在Nature报道了一个具有连接酶活性的DNA，能够催化与它互补的两个DNA片断之间形成的磷酸二酯键。迄今已经发现了数十种脱氧核酶。; 切割RNA的脱氧核酶 切割DNA脱氧核酶 具有激酶活性的脱氧核酶 具有连接酶功能的脱氧核酶 催化卟啉环金属螯合反应;10-23脱氧核酶二级结构;四、核酶/脱氧核酶的催化潜能和进化策略;
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