atmchk2p53通路在bap致神经细胞凋亡中的作用研究word格式论文.docxVIP

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2018-05-18 发布于上海
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atmchk2p53通路在bap致神经细胞凋亡中的作用研究word格式论文

ATM/Chk2-p53通路在B[a]P致神经细胞凋亡中的作用研究摘要目的:通过体内动物实验研究ATM/Chk2-p53通路在苯并[a]芘致大鼠皮质神经细胞凋亡中作用，初步探讨苯并[a]芘致神经细胞凋亡机制。方法:挑选50只雄性SD大鼠按体重随机分5组即空白对照组，0mg/kg，1.0mg/kg,2.5mg/kg和6.25mg/kgB[a]p组。采用腹腔注射隔日染毒建模，喂养3批老鼠150只，染毒1,2,3个月。染毒结束后处死大鼠，摘取脑组织石蜡包埋切片，TUNEL法测皮质组织神经细胞凋亡；Immunohistochemistry法检测皮质组织BPDE-DNAadduct；取皮质组织提取蛋白Western-blot法检测ATM,ATMser794,Chk2,Chk2thr68,P53,P53ser20,CleavedCaspase3,Puma蛋白表达。结果：1、神经细胞凋亡TUNEL检测:随着苯并[a]芘染毒时间与剂量增加，皮质组织神经细胞凋亡率出现增高趋势。苯并[a]芘2.5mg/kg组与空白对照组相比，染毒1,2和3个月时凋亡率分别增加0.59、0.93和1.58倍(P0.05)。6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，染毒1,2和3个月时凋亡率分别增加0.85、1.69和3.75倍，染毒三个月后凋亡率高达23.49%(P0.05)。析因分析显示染毒时间与剂量存在交互作用(F=13.923，P0.001)。2、皮质组织BPDE-DNAadduct含量随着B[a]P染毒剂量和时间增加呈现增高趋势，B[a]P染毒三个月时6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比分别增加161.5%(P0.05)。析因分析显示染毒时间与剂量存在交互作用(F=2.731，P=0.022)。3、Westernblot对大鼠皮质组织ATM/Chk2-p53通路检测显示，苯并[a]芘染毒三个月时，ATM蛋白表达量在1.0、2.5、6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比分别增加20.7%,17.2%，28.7%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时1.0mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，ATMser794蛋白表达量分别增加11.5%、34.7%和35.0%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时2.5mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，ATMser794蛋白表达量分别增加31.9%、17.9%和45.5%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，ATMser794蛋白表达量分别增加46.4%、34.6%和62.3%(P0.05)。苯并[a]芘染毒2和3个月时1.0mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，Chk2蛋白表达量分别增加63.5%和61.6%(P0.05)。苯并[a]芘染毒2和3个月时2.5mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，Chk2蛋白表达量分别增加60.0%和87.7%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，Chk2蛋白表达量分别增加77.3%、85.8%和165.8% (P0.05)。苯并[a]芘染毒二、三个月时，Chk2thr68 蛋白表达量在6.25mg/kgB[a]P 组与空白对照组相比分别增加92.2%,112.3%(P0.05)。苯并[a]芘染毒2和3个月时1.0mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，p53蛋白表达量分别增加35.9%和117.8%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时2.5mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，p53 蛋白表达量分别增加83.3%、92.1%和158.9%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，p53蛋白表达量分别增加108.3%、150.0%和255.3%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，p53ser20蛋白表达量分别增加31.7%、92.4%和173.4%(P0.05)。4、Westernblot对大鼠皮质组织CleavedCaspase3、Puma蛋白表达，苯并[a]芘染毒1,2和3个月时2.5mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，CleavedCaspase3蛋白表达量分别增加49.4%、61.3%和77.7%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时6.25mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，CleavedCaspase3蛋白表达量分别增加55.9%、94.3%和111.1%(P0.05)。苯并[a]芘染毒1,2和3个月时1.0mg/kgB[a]P组与空白对照组相比，puma蛋白表达量分