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微生物学实验教案(1) 第2周教学内容：实验一 授课班级：201生物科学：2 学生组数：2课时：实验 授课班级：201生物科学： 学生组数：2课时：实验 授课班级：201生物科学： 学生组数：2课时：实验：201生物科学： 学生组数：2课时实验 一、实验目的和要求 （一）知识要求 （二）技能要求 二、实验材料和用具 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(E．coli)菌液，待测菌菌液1～2种。美兰染色液、革兰氏染色液(草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95％乙醇、沙黄（石炭酸复红）液等)、香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸、试管、小滴管等。普通光学显微镜。 三、操作步骤 （一）细菌涂片的制备 1．涂片 用无菌操作方法从试管中沽取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌 2．干燥 于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。 3．固定 目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。 （二）美兰染色 1．染色 于制片上滴加美兰染液，染2~3min； 2．水洗 用水洗去剩余染料； 3．用滤纸吸干，油镜镜检。 结果：细菌被染成蓝色。 （三）革兰氏染色法 1．初染 于制片上滴加草酸铵结晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。 2．媒染 滴加卢戈氏碘液，1min后水洗。 3．脱色 滴加95％乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止（根据涂片之厚度需30s至1min），水洗。 4．复染 滴加石炭酸复红液复染1min，水洗。 5．用滤纸吸干，油镜镜检。 结果：革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。 四、注意事项 1．涂片务求均匀，切忌过厚。 2．在染色过程中，不可使染液干涸。 3．老龄菌因体内核酸减少，会使阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。 五、演示 制片方法及染色过程。 六、实验报告 （一）绘图 1．大肠杆菌与金黄色葡萄球菌美兰染色视野图。 2．大肠杆菌与金黄色葡萄球菌革兰氏染色视野图。 （二）记录美兰染色法和革兰氏染色法步骤，并进行结果分析。 七、问题和思考 1．涂片后为什么要进行固定？固定时应注意什么？ 试分析美兰染色法和革兰氏染色法在细菌分类中的意义。 微生物学实验教案(5) 第6周教学内容：实验五 细菌分离培养技术与培养特征的观察 授课班级：2012生物科学 本实验课时：3 学生组数：2 授课时间： 10月 日 节次：5-7节 教学目标： 掌握平板划线法分离纯化微生物的原理与方法；学会斜面移植和肉汤增菌方法；学会培养特征观察与描述； 1.本周教学学生课下学习量：2课时 课时目标：学生学会平板划线法分离纯化技术；学会斜面移植和肉汤增菌技术；学会培养特征观察与描述； 备注： 教学重点：平板划线法分离纯化方法；斜面移植和肉汤增菌方法；培养特征观察与描述； 教学难点：平板划线法分离纯化方法； 技能训练目标：平板划线法分离技术；斜面移植技术；肉汤增菌技术； 教学过程设计： 1. 学生签到 2. 检查预习报告、用提问形式了解学生预习情况 3. 学生做实验准备 4. 教师讲解与示教：实验原理、方法、技术与注意事项等 5. 学生开始实验、教师巡回指导 6. 检查学生实验完成情况等 7. 实验结果观察与记录，完成实验报告 8. 打扫卫生 教学方法：讲授与示教、探究法 教师课上活动：讲授、示教，强调技能训练内容 学生课上活动：规范完成整个实验操作，记录、分析结果 教学参考资料推荐：《微生物学实验》第三版，沈萍主编 学生课下活动设计： 完成本次实验报告；预习实验六，并完成预习报告； 课后反思： 课时内容（教学内容）： 基本内容 备注 实验五 细菌分离培养技术与培养特征的观察 一、实验目的和要求 （一）知识要求 （二）技能要求 二、实验材料 琼脂平板、琼脂斜面、肉汤、细菌培养物等 三、操作步骤 （一）细菌分离培养技术 1. 琼脂平板分离法 （1）平板划线分离法 菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板划线法进行纯种分离，此法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，经培养得到分散的由单个微生物细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。 但划线分离的培养基必须事先倾倒好，需充分冷凝待平板稍干后才可使用；为便于划线，一般培养基不