第五章-噬菌体和杂菌防治.pptVIP

①加强种子室灭菌、无菌操作及安全卫生措施。感染噬菌体的培养物不得带入无菌室、摇瓶间(因噬菌体可透过纱布棉塞飞扬），种子室应尽量减少与外界接触。 ②二级种子接种时停风扇关门窗，用焰火封闭。 ③消灭设备死角。定期检查设备，尤其是三级种子罐，罐顶、挡板、冷却管、罐底、搅拌器、罐壁与节门等处有无死角、 渗漏 及结垢，及时解决。 设备要易于清洗与维 修。管路要简化，阀门要可靠，空压机应选用无油润滑；发酵罐应定期去锈；防止产生“浓胞” ，以杜绝隐患。 ④认真进行培养液、发酵设备、空气净化系统及管路的消毒工作。 * 在谷氨酸发酵中，因为需要大量通入空气，所以必须高度注意由空气而来的污染。噬菌体在干燥状态比湿润状态稳定， 从空气中分离到的耐干燥的噬菌体，能长时间(半年以上）存活而浮游于空气中，是造成噬菌体污染的重要原因，要特别重视。 ①合理的车间布置 味精厂的车间布置应使发酵、等电(或其它方法的提取车间) 、空压车间相互隔开，形 成三角形，尽量远离。 味精厂的车间布置与一般化工厂不同，首先考虑的是怎样布置才能减少未来生产中的噬菌体污染，而不是省动力、省材料及联系方便等，以免造成易受污染的“先天性隐患”。 * * 谷氨酸发酵前期感染噬菌体，引起异常现象（不耗糖、不产酸），可采取下列措施加以挽救。 1.并罐法 利用噬菌体只能在处于生长繁殖细胞中增殖的特点，当发现发酵罐初期污染噬菌体时，可采用并罐法，即将其它罐批发酵16-18h的发酵液，以等体积混合后分别发酵，利用其活力旺盛的种子，不进行加热灭菌，亦不需另行补种、便可正常发酵。但要确认，并入罐的发酵液不能染杂菌，否则两罐都将染菌。 * * * 所谓杂菌污染，是指在发酵过程中生产菌以外的其它微生物侵入了发酵培养液。几乎所有的发酵工业，特别是通风发酵，都有可能遭受杂菌的污染。染菌结果，轻则产酸下降，重则导致倒罐。谷氨酸发酵要求纯种发酵，在整个发酵过程中必须防止杂菌的侵入。尽管谷氨酸周期不长，但是由于培养基营养比较丰富，产物又无抑菌能力，因此各个环节均须加强控制，严格无菌操作。 * * 3.污染杂菌的判断与确定 在确定了检查杂菌的时间及方法后， 一般都能判断出是否染菌，特别是镜检时，若发现菌体形态特征不一致，则可初步认为染菌。 在采用培养皿平板划线检查，特别是检查种子扩大培养及发酵液的无菌样品时，要注意在取样操作中造成的污染而产生假染菌（即实际上发酵液中没有杂菌，而平板划线中却长出杂菌）。 一般认为，即使是比较熟练的操作人员，也仍有造成假染菌的可能性， 这是由于发酵车间的空气中，杂菌较多，在自然环境下取样时，极容易从空气中污染杂菌。因此，操作应该迅速稳当，取样时，取样口必须彻底灭菌， 还应注意关闭周围窗户及排气风扇等，以减少空气流动。 二、杂菌污染的原因分析与防止 1．从染菌的现象分析引起染菌的原因 (1)从染菌的时间分析 ①早期染菌：可能是由于种子带菌，接种操作不当或培养基灭菌不彻底，环境污染和设备因素所致。 ②中、后期染菌：多数是空气过滤不严或泡沫顶盖、设备渗漏、补料操作不当引起。 ⑵从污染的杂菌类型分析 ①污染耐热芽孢杆菌：多数是由于培养基灭菌不彻底或设备存在死角所引起的。 ②污染无芽孢杆菌、球菌等不耐热菌：可能是从蒸汽的冷凝水中带来的，或空气系统不严造成。 ③感染浅绿色菌落(革兰氏阴性杆菌、球菌 ），来源是水，可能设备渗漏或冷却器穿孔。 ④感染霉菌：多数是由于无菌室灭菌不彻底或无菌操作不当造成。 ⑤感染酵母：主要来自糖液灭菌不彻底，特别是放置时间较长的稀糖液。 （3）从染菌的幅度分析 ①大批发酵罐染菌是指整个工厂各个产品的发酵罐都出现染菌现象，而且染的是同一种菌，主要是空气过滤器除菌不净，空气带菌而造成。 ②部分发酵罐（或罐组)发生染菌，例如生产同一产品的几只发酵罐，都发生染菌。这种染菌如果出现在早期，可能是种子带杂菌，如果染菌发生在中、后期，则比较可能是流尿系统染菌或空气带菌所造成的。在使用连续灭菌的设备中，如果用连消进料的发酵罐都出现染菌，则可能是连消系统灭菌不彻底而引起。 ③个别发酵罐连续染菌，较多地是由于设备问题而造成的，如阀门的渗漏或罐体的破损，特别是蛇形管的穿孔，有的不易觉察。有时设备破损引起的染菌，会出现每批染菌时间向前推移的现象，即第二批染菌时间比第一批提早，而第三批又比第二批提早。 ④个别发酵罐偶然染菌的原因最为复杂，各种染菌途径都可能引起。 根据谷氨酸发酵情况分析， 造成染菌原因以设备问题(设备渗漏、管道不严、设备死角 ) 和空气问题(过滤器不严、过滤器失效、过滤器受潮)为主，种子（ 二级种染菌）次之， 而培养基消毒不透的情况较少。 2.造成污染的主要途径 (1)种子带菌