临床常见标本的微生物学检验.pptVIP

临床常见标本的细菌学检验 临床标本细菌学检验的原则 安全 准确 快速 敏感 低耗 加速细菌生长 在培养基中加入必要的营养物质。胰胨、天然蛋白和酵母浸膏等。 改善培养环境。如以37 ℃水浴代替温箱，使温度恒定，同时尚可通过水浴中 的液体对流来增加细菌与营养物质的接触机会；加入适当的药物如硫酸镁、对氨基苯甲酸、枸橼酸钠、青霉素酶等以抵消和破坏培养标本中的抗菌物质。 加速细菌生长 在培养基中加入有效的生长刺激剂 （如小量的萘乙酸、硫胺素、核酸、吡哆 醛、谷酰胺、叶酸、泛酸、核黄素、生物素、烟酰胺等）。这些物质多为辅酶或辅基的 成分，在细菌新陈代谢中起重要作用。 快速分离 在培养过程中，采取多次观察和移种并把移种量加大，这样可提前和较容易发现阳 性结果。尤其对血液培养更应如此，每6 ～8 小时进行1 次，连续3 天，有结果随时与 临床取得联系，然后再仔细鉴定细菌的种类，不要拘于常规鉴定，延误报告。一般3 天 后不见生长，可改为每天移种1 次，仍继续观察数天才可。 简易快速鉴定 快速检验对及时控制感染，预防败血症的发生十分重要。在临床细菌学检验中，常 常主要根据细菌形态、革兰染色结果，菌落特征，再加上快速的生化反应 （如氧化酶试 验） 及血清学试验等特点加以报告。 认真检查细菌学检验单 收到送检单后，及时登记； 认真检查送检单上的标本类型、来源、送检目的等； 核定抗生素的使用情况； 核定标本的采集方法和时间。 标本的采集和处理 无菌操作 标本种类 采集时间 安全防护 及时检验和报告 识别污染菌 观察菌落是否在划线上 ； 结合拟培养细菌的生长特点去对照判断 ； 注意观察培养时间。非致病菌与致病菌的生长速度不同； 涂片染色检查，观察是否与目的菌一样。值得提出的是机体的某些部位通常是 无菌的，若检出细菌，应视为致病菌 （如血液、骨髓、脑脊液等）。 血液及骨髓标本的细菌学检验 操作方法 1．将患者拟采血部位放平，扎以止血带，选好静脉穿刺点，以皮点为中心用2．5 ％～3 ％碘酊从内向外周擦拭，待干后再以同法用75 ％乙醇脱碘。消毒范围不得过小。 2．以无菌手续由静脉取血5ml ，立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使 充分混合，以防止凝固。 注意事项 1．血液标本应在病人发热1 ～2 天内或发热高峰采集培养为宜，此时阳性率较高。 2．培养基与血液的比例为10∶1 。 3．培养一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，培养对营养要求较高的细菌用肝 浸液或胰胨肉汤等。 注意事项 4．采血和接种时应严格注意无菌操作，避免污染 杂菌。 5．抗生素可影响细菌检出的结果。故在采集标本时应力争在抗菌药物治疗 之前。如果病人曾服用磺胺类药物，应在每100ml 培养基内加对氨苯甲酸5mg ，以防止 磺胺类药物对细菌的抑制作用。如果病人已用青霉素治疗，应在培养基中加入青霉素酶100U／50ml （青霉素酶不耐热，应在临用时加入）。若病人已用其他抗生素治疗时，可用 硫酸镁肉汤增菌。 6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。 一般细菌的检验 标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液变色、指示剂变 色等现象，并记录之。 如有细菌生长，肉汤可呈现各种不同的生长现象，若发生混浊， 大多可疑为革兰阴性杆菌； 若均匀混浊有绿色荧光，则可疑为绿脓杆菌；上面澄清，下 面有沉淀，可疑为链球菌； 若见自下而上的溶血现象，可疑为溶血性链球菌； 若呈现肉 冻样凝固现象，疑为葡萄球菌； 若表面有灰白菌膜，疑为枯草杆菌或类白喉杆菌。 一般细菌的检验 当疑有细菌生长时，应以无菌操作挑取培养物涂片进行革兰染色镜检。一旦见 有细菌生长，并能排除污染，应及时转种于血平板或其他培养基进行药物敏感试验或分 离培养。根据菌落特征及菌体染色镜检形态，可得出初步印象，并需继续培养，按各种 属细菌加以鉴定。报告：“有XX X 菌生长”。 一般细菌的检验 如不见细菌生长，应继续培养至第7 天，取出后接种于血平板，经培养仍无细 菌生长时，可报告为：“经7 天培养无细菌生长。” 对于亚急性心内膜炎病人标本，应培 养一个月，才能作出结论。 布氏杆菌的检验 将可疑为布氏杆菌的血液标本接种于肝浸液2 支，分别置于10 ％二氧化碳环境中及普通环境中35 ±1 ℃培养，每天观察一次，每隔5 天移种一次血平板。 培养1 周后， 若肝浸液有此菌生长时，出现肉眼可见的轻度混浊，久之可出现菌膜并有粘稠性沉淀 物。此时应作涂片染色镜检，并立即移种于2 份肝浸液平板或血平板，分别置于10 ％ 二氧化碳及普通环境下培养。如菌落及涂片染色镜检形态典型，再作布氏杆菌血清凝集 试验，如为阳性，可报告为：