时间分辨在乙肝检测中的应用-临床.pptVIP

时间分辨荧光免疫在乙型肝炎诊疗中的应用 中南大学湘雅三医院检验科 戴春梅 时间分辨荧光免疫 （TRFIA）（Time-Resoled Fluoroimmunoassay） TRFI检测原理 TRFI检测是近年来年发展起来的一种新的免疫测试方法，是利用镧系元素“铕”作为示踪物标记抗原或抗体，在免疫反应完成后加入特殊的增强液，将“铕” 从标记抗原或抗体上解离下来并与增强液中的组分形成新的具有强烈荧光的螯合物，用特定的仪器测定荧光强度，从而判断反应体系中被测物浓度 。 TRFI检测 理论上，荧光是最灵敏的检测手段。由于许多分子间和分子内的变化会改变标记物的荧光发射。因此，很早就把它作为均相分析技术可能的新的手段。偏振，淬灭，时间关联，荧光寿命改变以及荧光共振能量转移（ FRET）已经被广泛应用在对分子间作用的研究中。 镧系原子及螯合物独特的荧光特性 荧光寿命极长 稀土元素螯合物（60~900 us) 铕：714 us 普通荧光免疫中荧光团：1~100 ns 样本中蛋白质荧光：1~10 ns，易猝灭。 Stokes位移大（大约273 nm） 铕：发射光 613 nm、激发光 340 nm 荧光素的Stokes位移为 28~50 nm 激发光谱带较宽。 荧光光谱特异性强（发射光谱带很窄：615± 5 nm） 解离-增强技术（DELFIA）使稀土元素荧光性提高100万倍。 时间分辨荧光免疫的试剂种类（重点） 肝炎系列 乙肝五项（国内唯一获SFDA）、丙肝*、HIV*、梅毒* 内分泌科检查 甲状腺系列： Ultra TSH、T3、T4、FT3、FT4 TBG、TG 、TGAb 、TPoAb 糖尿病系列： Insulin、C-Peptie 生长激素类： hGH 肿瘤科检查 AFP、CEA、PSA、hTG、β-2 Micro、NSE、PSA（F/T）、 PAP、 CA-50*、CA-125*、CA-199*、CA-153*、CA-724*、CY-211* 遗传科检查 产前筛查：AFP*/ ?HCG* 、PAPPA*、uE3* 新生儿筛查：Neo-TSH*、Neo-T4*、Neo-17a-OH Prog、G6PD 乙型肝炎病毒 HBV是嗜肝DNA病毒科中哺乳动物病毒属的一员。完整的HBV颗粒直径为42nm，又名Dane颗粒，分为包膜与核心两部分，包膜上的蛋白质，亦即HBSAg,在肝细胞内合成，大量释出于血液循环中，本身并无传染性。 Dane颗粒核心部分含环状双股DNA, DNAP（DNA聚合酶），核心抗原和e抗原，是病毒复制的主体。HBV-DNA由3200碱基对组成，分长的负链(L)和短的正链(S), L链上有4个开放的读码区：S、C、P、X区，S区又分为前S1、前S2及S基因区，分别编码前S1、前S2蛋白及表面抗原，C区编码核心抗原，前C区编码e抗原，P区编码DNAP, X区编码X抗原。 HBV的抵抗力很强，能耐受60 ℃ 4小时及一般浓度的消毒剂；煮沸10分钟，65 ℃10小时或高压蒸汽消毒可以灭活，在血清中30-32 ℃可保存6个月，-20 ℃中可保存15年。 HBV的抗原抗体系统 HBsAg与HBsAB 成人感染HBV后最早1-2周，最迟11-12周血中首次出现HBsAg，急性自限性感染时，血中HBsAg持续时间大多为1-6周，最长可达20周，在慢性和无症状携带者中可持续存在多年，自然转阴率为1-2％，HBsAB出现于HBsAg转阴后一段时间，10年内转阴，是一种保护性抗体。 HBeAg和HBeAB HBeAg为病毒复制时产生的一种可溶性蛋白抗原，在血清中出现稍后于表面抗原而消失较早，是活动性复制和有传染性的重要标志。 HBeAB在HBeAg阴转后，与HBsAB同时出现，表示病毒复制减少，一般仅持续1-2年，长期存在时，提示病毒DNA已与属主DNA整合。 HBcAg和HBcAB HBcAg主要存在于受感染的肝细胞核内，血液中的Dane颗粒经处理后也能检出，是病毒复制的标记。血中HBcAB出现于HBsAg出现后3-5周。 窗口期：早期低水平的HBV感染，血中仅有HBcAB阳性，或者 HBsAg已消失，HBsAB尚未出现，血中只能检测出HBcAB，此阶段称为窗口期。 乙肝病毒 的流行特征 地区：无症状乙肝病毒携带率热带地区高于温带，我国江南地区明显高于江北地区，动部沿海地区平均为10.8%，高于西北边降低区8.58%；华北地区相对低，为5.5%，中南和华东部分省市为最高携带率地区，乡村10%，城市8%。 乙肝病毒 的流行特征 民族：国内调查发现，HBsAg的亚性具有一定民族性，汉族adr为多，adw次之；蒙族、维吾尔族、哈萨克族、