野蔷薇苷对H2O2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究.pdf

中文摘要 的影响。 3．5采用激光共聚焦显微镜，观察“野蔷薇苷”对心肌细胞内Ca2+ 浓度的影响。 3．6采用免疫印迹(Western Blot)技术，检测cryab、Pcryab、akt、 Pakt、bcl．2、bax、Cyt．C、caspase9、caspase3蛋白的表达水平；并通过 察Pakt、caspase3蛋白的表达变化，探讨“野蔷薇苷”抗心肌细胞氧化性 损伤的分子机制。 结果： l氧化损伤模型的建立 随着过氧化氢处理时间的延长和过氧化氢浓度的升高，心肌细胞活力 逐渐降低，其中采取200pmol／1过氧化氢处理3h后，细胞损伤明显，且 细胞存活率稳定、适中，适于建立心肌细胞的氧化性损伤模型。 2药物浓度的确定 通过MTT实验和LDH检测的结果，确定野蔷薇苷高、中、低浓度 浓度选择为l×10以1tool／1。 3野蔷薇苷对H202诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用 3．1 MTT结果：与正常对照组对比，H202损伤模型组心肌细胞活力 明显降低(P0．01)，给予各浓度野蔷薇苷和维拉帕米处理后，心肌细胞 活力较模型组明显提高(氏O．01)。 3．2生化指标结果：野蔷薇苷各浓度组和维拉帕米处理后能够明显 蔷薇苷各浓度组及维拉帕米组均能够明显抑制H202引起的心肌细胞内 CAT(P0．01)和GSH-Px酶的水平降低(p0．01)。 3．3 Hoechst—PI染色：与正常对照组相比，损伤模型组细胞核凝集， 细胞膜破裂，大量细胞处于晚期凋亡呈红色荧光，而野蔷薇昔各浓度组能 够明显改变氧化损伤引起的染色质凝集，减少红染的细胞数目，改善细胞 形态。 3．4 DAPI染色：野蔷薇苷处理组与损伤模型组相比，可明显的改善 万方数据 中文摘要 细胞氧化损伤引起的心肌细胞形态学改变。 3．5流式细胞术结果：给予H202处理后，心肌细胞ROS水平明显提 高(氏0．01)，心肌细胞凋亡率明显增高(氏0．01)，野蔷薇苷各浓度组与 的细胞的凋亡率(氏0．01)。 3．6激光共聚焦结果：与正常对照组相比，模型组荧光强度显著增强， 野蔷薇苷各浓度组及维拉帕米组与模型组相比，荧光强度显著降低。 4野蔷薇苷抗H202诱导心肌细胞氧化损伤的机制研究 4．1 Westem blot结果：与正常对照组相比，H202损伤模型组心肌细 csapsae3(P0．01)的表达水平。 4．2给予P13K通路阻滞剂后细胞活力变化：野蔷薇昔处理组给予 活力明显降低(P0．05)，与野蔷薇苷处理组相比，细胞活力水平显著减 弱(P0．01)。 4．3给予P13K通路阻滞剂后westemblot结果：野蔷薇苷处理组加 入LY294002后Pala的表达水平较损伤模型组和野蔷薇苷处理组均明显降 野蔷薇苷处理组明显增加(伙O．01)。 结论： l野蔷薇苷能够明显减轻H202诱导的氧化损伤，提高心肌细胞活力。 2野蔷薇苷能够明显增加心肌细胞清除氧自由基、活性氧的能力。 3野蔷薇苷能够减少H202诱导的心肌细胞凋亡，抑制细胞内钙超载。 4作用的机制是通过上调aB晶体蛋白的磷酸化，调节P13K／AKT信 号通路，上调Pakt的表达，改善线粒体的功能，从而抑制线粒体凋亡通 路，发挥抑制心肌细胞凋亡的作用。 关键词：心肌细胞，H9c2野蔷薇苷，H202，抗氧化，细胞凋亡 万方数据 英文摘要 rosamultin andMechanismsof ProtectiveEffects H202一 against