人教版选修1专题3课题2月季的花药培养（共28张PPT）.ppt

* 课题2 月季的花药培养 专题3 植物的组织培养技术 牡丹 月季 一、 基础知识 1、被子植物的花粉发育 花粉： 花丝 花药 雄蕊 囊状结构，内有很多花粉粒 雄蕊 大多数被子植物的花药是由4个花粉囊（少数植物为2个）组成，分为左、右两半，中间由药隔相连。 花粉囊 当花粉囊的壁组织逐步发育分化时，会形成大量的花粉母细胞（小孢子母细胞）。 花粉粒是由花粉母细胞经过减数分裂而形成，因此，花粉粒是单倍体的生殖细胞。 ② 花粉 被子植物花粉的发育要经历： 四分体时期、单核期和双核期等阶段。 被子植物花粉的发育过程 A未成熟的花药 B花粉粒发育过程的三个阶段 C与成熟的花药（示花粉囊开裂，散出花粉粒） 1.花丝； 2.未成熟花粉囊； 3.药隔；4.小包子母细胞； 5.四个单相的小包子包在同一壁内（四分体）； 6.成熟花粉粒； 7.已成熟的花粉囊； 8.花粉粒； 9.花药的裂口 2、产生花粉植株的两种途径 花粉 花粉 胚状体 愈伤组织 丛芽 生根 移栽 脱分化 分化 再分化 诱导 脱分化 两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。 资料 胚状体： 又称体细胞胚，这种体细胞在形态上能够转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，而且他的发育过程也与合子胚类似，胚芽、胚根、胚轴等结构完整，就像一颗种子。 3、影响花药培养的因素 花粉植株诱导成功的关键因素： 适宜的材料 培养基的组成 盛开的或略微开放的花都不易选做实验材料 月季 答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 思考 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 通常从生长旺盛的植株上取早期现蕾的花药或花粉进行培养，较易形成花粉植株；取蕾前，供体植株的栽培条件的好坏也影响花粉植株的诱导率。 A 亲本植株的生长条件 其他影响因素： B 材料的低温预处理 有报道称低温（如4℃）预处理一定时间（如48 h）可以明显促进胚状体的形成，有的经短期高温（30 ~ 40℃）处理也能够促进胚状体的形成，但是不同作物对所需的最适处理温度和时间要求不同。 C 培养条件 培养温度通常保持在25℃左右，光照因作物种类不同而异。在花粉培养的早期，黑暗或弱光条件可能更有利于花粉分裂的启动。 D 接种密度 （一） 材料的选取 1. 选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 2. 最常用的方法：醋酸洋红法、焙花青—铬矾法。 某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青—铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 二、 实验操作 （二）材料的消毒 花蕾 无菌水清洗 吸干表面水分 0.1％的氯化汞溶液 2-4 min 无菌水清洗3-5次 70％的酒精浸泡30s （三）接种和培养 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 对培养出来的植株做进一步的鉴定和筛选。因为在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。 三、 结果分析与评价 1、选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 2、无菌技术是否过关 如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。 *