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南京慧基生物技术有限公司 GenEscortTMⅢ 使用说明书 一． 产品介绍 GenEscortTM Ⅲ 是一种多用途的转染试剂，该试剂由可生物降解的超高分枝的 PEI 衍 生物与其它组分复合而成。对各种贴壁细胞有较高的转染效率、也适用于转染悬浮细胞和原 代细胞。可用于转染大分子 DNA 、小分子寡核苷酸和 siRNA 等。特别适用于携带质粒或 DNA 、RNA 片段用于注射小鼠的静脉、皮下和腹腔等部位进行体内动物实验。 TM GenEscort Ⅲ 与传统的脂质体相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势，主要 表现为： 对绝大多数贴壁细胞有较高的转染效率 可用于转染原代细胞和悬浮细胞 操作简单，结果重复性好 转染试剂/DNA 复合物的形成时间只需 10-15min，可以在最短的时间内完成转染 转染试剂/DNA 复合物可以直接加入完全细胞培养基中， 血清和抗生素不影响其转染效果 细胞毒性低，转染前后不需要更换培养基，不用去除转染试剂 需要较少的转染条件优化 二．运输与储存 运输：常温 储存：2－8℃ 一年； －15℃至―20℃ 二年以上 三．转染前的准备与注意事项 1．细胞接种 为了取得较高的转染效率，推荐使用在 50 代以内的细胞进行转染实验。要求在转染前 24 小时对细胞再次传代，在培养基中加入抗生素对转染效果没有影响。转染时细胞密度一 般应为 60-80%，但这因细胞株的不同而变化，对最常用的细胞株建议细胞密度为 70-90%。 以 24 孔板的转染为例，最理想条件是在转染前 24 小时，每孔接种(500 µl )0.5－2×105 个细胞。在大多数情况下，如果在细胞贴壁后(接种几小时后)即进行转染，也可以得到相近 的结果。表 1 列举了不同细胞培养装置的推荐细胞数量。 2 ．DNA 的质量 为了取得较高的转染效率，推荐使用高纯度的质粒。仅仅根据 DNA 电泳条带的情况估 计 DNA 的量和纯度是不够准确的。建议对提取的质粒DNA 的量和纯度进行检测，DNA 含 量 (μg/mL)=50 × (260 nm 的读数) × 稀释倍数，通过检测质粒 DNA 在 260nm 和 280nm 的 OD 值的比值（OD260/OD280 ）估计核酸的纯度，OD260/OD280 值应该≥1.8。转染时不同 品质的DNA 用量不同，以 24 孔板转染为例，使用酚氯仿沉淀法提取的质粒 DNA 一般每孔 需要加入≥2μg 质粒 DNA ，而使用 Qiagen 分离柱或类似方法提取的质粒 DNA 一般每孔需要 加入 0.5-1μg 质粒 DNA 。 慧基生物、转染利器 T o s t r e n g t h e n y o u r r e s e a r c h c a p a b i l i t i e s a n d t o f a c i l i t a t e i n n o v a t i o n 电话：+86 25；传真：+86 25 南京慧基生物技术有限公司 表 1 不同细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐细胞数量 每装置面积 细胞培养液总体积 细胞培养装置 接种细胞数量 2 （cm /孔或皿） （每孔或每皿）* 96 孔板 10 000 - 30 000 0.3 0.1 ml - 0.2 ml 48 孔板