条斑紫菜(Pyropia Porphyra yezoensis)病原学研究及琼胶降解菌筛选汇总.pdf

yezoensis)病原学研究 条斑紫菜(Pyropia／Porphyra 及琼胶降解菌筛选 摘要 条斑紫菜(Pyezoensis)是红藻门的代表性物种之一，对其起源进化和环境 胁迫适应机制等科学问胚的关注，使其成为藻类模式物种之一，具有重要的科研 价值。条斑紫菜自然分布于西北太平洋沿岸潮间带，是冬春季的优势物种之一， 具有重要的生态价值。目前，条斑紫菜在中国、日本和韩国被大规模栽培，年产 值达数十亿美元，具有重要的经济价值。但近年来，随着条斑紫菜栽培规模的持 续扩大，病害发生的频率、规模和危害程度也逐年增加，对条斑紫菜病害进行病 原学和致病条件的研究．不仅可以为制定病害防治措施提供依据，而且也将为抗 病品系的筛选提供条件。本论文从分离紫菜病原菌，深入研究其致病原因以及各 环境因子对病害发生的影响。 绿斑病是条斑紫菜配子体幼体时期的常见病害。本论文通过分离、培养、回 感确证了绿斑病病原苗．分子生物学及生理生化特征鉴定结果表明其病原为 Pseudoalteromonas carrageenovora，该病原菌为革兰氏阴性杆菌，具有很高的蛋 白酶活性和脂酶活性，此外多种芳胺酶反应为阳性。研究发现该病原菌致病性与 环境因素相关，结果显示温度以及紫菜养殖密度对病情的蔓延影响较大，高温以 及高密度养殖会加速绿斑病病情的发展，而海水比重在一定范围内变化不影响该 痛的发生。 赤腐病是条斑紫菜生产最严重的病害之一。本研究以疑似感染赤腐病的条斑 紫菜为材料，观察了病斑组织的细胞学和亚显微结构，通过分离、培养、回感确 证了病原菌，并进行了分子生物学鉴定。观察发现，患病叶状体上可见大小不一 的病斑，病斑中央部分呈浅绿色，周围红色．靠近来感染部位呈一圈鲜紫红色。 光学显微镜观察，可见病斑处细胞己经失去正常细胞的形态而被菌丝串联在一 起，此特征与赤腐病病症类似。对分离培养的病原卣进行ITS序列分析，结果显 示该真菌为交链孢霉菌(Allernariasp)，与腆型赤腐病病原菌并不一致。 藻类病原菌通常具有分解海藻胶的能力，本研究从不同海藻的腐烂材料咀及 海参肠道巾分离纯化琼胶降解菌，开展了菌株鉴定、培养条件优化、』“琼胶酶条 件优化和琼胶酶基因克隆等研究。通过初筛、复筛共获得4株具有较高琼胶降解 能力的细菌HD、儿、OJ和Hs。相对粗酶活力测定结果显示，4株琼胶降解菌 在2216E海水培养基中产酶状态最好，菌株产酶的最佳条件与最适生长条件一 致，4株菌琼胶酶晟大相对酶话力相近，且胞外酶活力远远大于胞内酶，一般在 培养36h后酶活力达到屉大。经鉴定，4株菌均为革兰氏阴性苗，呈杆状。】6S rDNA序列分析显示菌株HD、JL和}js属于噬琼胶菌属dgarivoranssp。而菌 株QJ该基因序列与GenBank数据库中相关序列的同源性均低于95％，可能是一 新属或新种。菌株HD、儿和Hs都能克隆出长度为2868bp的B琼胶酶基因， 而菌株QJ没有克隆出B琼胶酶基因。分离得到的琼胶降解菌一方面可用于测试 其对藻类的致病能力，另一方面可生产琼胶酶作为制备藻类单细胞或原生质体的 工具酶，具有良好的应用前景。 关键词：条斑紫菜叶状体绿斑病假交替单胞菌交链孢霉菌琼胶降解菌 J on and EtiologicastudyPyropia／Porphyrayezoensis Screeni of i bacteri a ng agarase-producng Abstract oneofthe representative 啊opia／PorphyrayezoensisisspeciesofRhodophyta， theconcertiofits andenvironmentalstress mechanisms origin，evolution