SK8223(SK8224)血液基因组DNA快速抽提试剂盒.pdfVIP

血液基因组 DNA 快速抽提试剂盒 试剂盒组成 组分 SK8223, 50 次 SK8224, 100 次 Buffer TBP 40 ml 80 ml Buffer Digestion 10 ml 20 ml Buffer PR 4 ml 8 ml Proteinase K 1.2 ml 2.4 ml TE Buffer (pH 8.0) 50 ml 100 ml 操作手册 1份 1份 保存方法及注意事项 本试剂盒于常温运输，室温（15-25°C）干燥保存，有效期为一年，4°C 保 存时间更长。 该试剂盒中提供的Proteinase K 溶液为特别优化的配方，方便使用，而且 非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存 期限，请置4°C 保存。 Buffer Digestion、Buffer TBP 中含有刺激性化合物，操作过程中应避免直 接接触，如沾染皮肤或眼睛请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮 助。 产品介绍 本试剂盒首先利用红细胞裂解液（Buffer TBP）去除不含DNA 的红细胞。然 后通过裂解液（Buffer Digestion）裂解白细胞，使DNA 游离在溶液中。再通过 高盐沉淀法去除蛋白等杂质。从 300 µl 无核抗凝血液可以获得 10-20 µg DNA，OD260/OD280 比值一般为1.7-1.9。抽提出的DNA 可用于酶切、PCR、文库 构建、Southern blot 等相关实验。 标准抽提步骤 自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力 ≥ 12,000 × g）、1.5 ml 离 心管、75% 乙醇、异丙醇等。 Buffer Digestion 在低温下可能产生沉淀，使用前请检查 ，如有沉淀，请于 56°C 溶解后使用。 提前将水浴锅调至 56°C 备用。 1. 样品处理 a. 含无核红细胞的血液样品（如人血液）：取300 μl 抗凝全血加入600 μl Buffer TBP，充分混匀，室温放置1 min 至红细胞完全裂解，此时液体为透明 红色。 b. 含有核红细胞的血液（如家禽血液）：取10-20 μl 抗凝全血，直接进行步骤 3 。 2. 8,000 rpm ，离心1 min ，弃上清。用500 µl TE Buffer 重悬沉淀，8,000 rpm，离心1 min，小心弃掉上清，在一干净的吸水纸上倒置几秒钟，吸弃残液。 可再用TE Buffer 洗涤一次至沉淀为白色。 3. 加入180 µl Buffer Digestion 和20 µl Proteinase 溶液，震荡混匀。56°C 水 浴15-30 min 至细胞完全裂解。 ✔ 如需得到无 RNA 的 DNA ，可在水浴后加入 20 µl 的 RNase A （20 mg/ml ），混匀后 室温放置 2-5 分钟。 ✔ 水浴过程中，每 10 分钟颠倒混匀一次，可促进细胞裂解。混合液变澄清透明为裂解完 全。如溶液未变澄清，说明细胞裂解不彻底，应适当延长水浴时间，否则将可能降低 DNA 的得率或导致提取的 DNA 不纯。 4. 加入60 µl Buffer PR ，充分颠倒混匀，-20°C 冰箱放置5 min 。 5. 室温10,000 rpm 离心5 min，将上清（约200 µl ）转移到新的1.5 ml 离心管中。 6. 加入等体积的异丙醇，颠倒5-8 次使之充分混匀，室温放置2-3 min 。室温10,000 rpm 离心5 min，弃上清。 7. 加入1 ml 75%乙醇，颠倒漂洗1-3 min，10,000 rpm 离心2 min，弃上清。 ✔ 漂洗时一定要使沉淀悬浮起来。 8