GB/T 17999.1-1999SPF鸡　红细胞凝集抑制试验.pdf

GB/r17999.1--1999 前 台 本标准以我国建立的HI方法为基础，参照美国SPAFAS公司的有关操作规程，规定厂SPF鸡 红细胞凝集抑制试验。 SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检 测方法 本标准为S《PF鸡 红细胞凝集抑制试验》。 SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分: GB/T17999.2-1999 SPF鸡 血清中和试验; GB/T17999.3-1999 SPF鸡 血清平板凝集试验; GB/T17999.4一1999 SPF鸡 琼脂扩散试验; GB/T17999.5-1999 SPF鸡 酶联免疫吸附试验; GB/T17999.6-1999 SPF鸡 胚敏感试验; GB/T17999.7--1999 SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验; GB/T17999.8 1999SPF鸡 试管凝集试验; GB/T17999.9-1999SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。 本标准山农业部畜牧兽医司归日 本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所。 本标准土要起草人:陈德威、赵立红、靳彦华、张秀美、李军。 中华人民共和国国家标准 Gu/r 17999.1-1999 SPF鸡 红细胞凝集抑制试验 SPF chicken Hemagglutinationinhibitiontest 1 范围 本标准规定厂红细胞凝集抑制试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等 本标准适用于SPF鸡感染以下病原微生物后的血凝抑制抗体监测:禽流感病毒(A型)(AvianIn- fluenzaVirus(TypeA)D.传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus)，新城疫病毒(Newcastle DiseaseVirus),X腺病毒I群(减蛋综合症)(AvianAdenovirusGroup11),A毒支原体(Mycoplasma Gallisepticum)，沿液囊支原体(MycoplasmaSynoviae)。 2 原理 许多病毒井有凝集动物红细胞的能力。这种凝集红细胞的能力能被特异性抗体所抑制，因此可用已 知病毒检测相应的血凝抑制性抗体 3 试剂和器材 3.1 试剂 3门门 血凝抗原 3.1.2 阴性、阳性血清 3.13 被检血丫青 31.4 鸡红细胞 11.5 0.850o生理盐水 3.1.6 阿氏液 3.2 器材 3.2.1 9sTL微杖血凝板(U型)。 3.2.2 微Ifr移液器(TDtoId一200k])及吸头 12.3 水浴锅。 32.4 r=3匕机与锥形刻度离心管 4 操作程序 4.飞 抗原血凝效价测定 41.1 10%和 ().5乡石鸡红细胞液的制备 4.1.1-1采鸡血:用注射器吸取阿氏液约1m工一取3口龄一功日龄SPF鸡(最少两只)，从胸骨尖下方 约!.3cm处将注射器针头刺入心脏.吸取心血约2ml,-,tm工，与阿氏液轻轻混合，放入装有10ml.阿 氏液的离心竹中 4.1.1.2洗涤鸡f_1ML胞:将离心管中的血液经1500r/mi。一]800r/min离心8min,弃上清液，沉淀 兰It1l1}鲤Ll:R,鱼型丝IGl二q?立50(竺竺二800竺min,丝二min,911些P达上lNR丝.Ya:燮 国家质量技术监督局1999一们一10批准 2000一04一01实施 CB/r『17999，1一1999 胞}几层的自细胞薄膜，再重复以仁过程后，加入阿氏液02ml，轻轻混合成红细胞悬液，4〔保存sd备 用 4门门.3 1。%鸡红细胞悬液:取阿氏液保存不超过sd的红细胞液，在锥形刻度离心管中离心150。:/ mm一18)0(r/mnismtn，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(ml_)，加人9倍体积(。1)的 生理盐水.用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞均匀混合 4门门.4 0.5%鸡红细胞液:取棍合均匀的01%鸡红细胞悬液lml，加