[医学]11年血型鉴定与交叉配血[精品].ppt

实验原理 加入聚凝胺 离心 加入重新悬 浮液 无抗体抗原反应 红细胞散开 有抗体抗原反应 红细胞凝集 * 试验的结果判读 阴性：凝块在1分钟内分散，供、受者血液配合 阳性：出现不同强度的凝块，供、受者血液不配合 实验结果必须在三分钟内判读 * 聚凝胺法的缺陷 本实验对检出Kell系统抗体不理想，不能检出抗-K，对阴性结果要加做抗球蛋白实验，以免漏检 我国K基因频率几乎为0，kk型几乎为100%，至今未发现Kell系统抗体，因此聚凝胺法在我国广泛应用 而国外K基因频率为7-9%，用聚凝胺法易漏检，故少单用 肝素聚凝胺有抑制作用 * 方法学评价 快速简便，假阳性少 适用于急诊抢救患者的交叉配血 * 微柱凝集试验技术 1986年Lappierre发明的微柱凝集试验,是将人RBC血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行 目前常用有二种：凝胶和玻璃珠 * 微柱检测系统的组成 反应室：柱的上端，加实验样本的空间 检测管： 反应介质：凝胶或小玻璃珠 试剂：各种凝集反应所需，如促凝剂、定型试剂、抗球蛋白试剂等 * 微柱凝集试验技术的原理 凝胶或小玻璃珠的间隙形成了分子筛作用，只允许游离的RBC通过，凝集反应阳性的RBC凝块留在微柱凝集检测管的上面或中间，未凝集的游离RBC将通过凝胶或小玻璃珠的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部 * 实验材料 根据不同的血型血清学工作需要，选择相应的微柱凝集检测系统（严格按试剂说明选择和使用），微柱凝集离心系统，微量加液器，检测样本的RBC悬液，检测样本的血清或血浆，或试剂RBC悬液，定型血清和生理盐水等 * * * 操作流程 配制RBC悬液 加样加试剂 专用孵育箱中孵育 在专用微柱凝集离心机中离心 判读凝集反应结果 * 微柱凝集交叉配血 配制: 0.8%RBC悬液(10μl RBC+1ml 生理盐水) 主侧：50 μl 0.8%献血者RBC + 25 μl受血者血清（血浆） 次侧：50 μl 0.8%受血者RBC + 25 μl 献血者血清（血浆） 孵育: 37℃，15min 离心: 1000 rpm，10min * 加样图示 * 结果判读 * * * * * * * 盐水介质的不足 只能检出IgM性质的抗体 不能检出IgG性质的抗体 * 酶试剂对抗原的影响 可以增强一些血型抗原与抗体的反应，其中以Rh和Kidd血型系统最为显著 也可使一些RBC抗原的结构破坏或变性，其中以M、N、S、Fya、Fyb最为显著，这时就可选用抗球蛋白技术检测 对一些碳水化合物结构为代表的抗原作用可以不变或是增强，如ABO、P1、Lewis、H、I等 * 抗球蛋白试验假性原因 多操作步骤影响 洗涤因素 试剂失效（IgG抗体致敏RBC作对照） * 聚凝胺法的缺陷 本实验对检出Kell系统抗体不理想，不能检出抗-K，对阴性结果要加做抗球蛋白实验，以免漏检 我国K基因频率几乎为0，kk型几乎为100%，至今未发现Kell系统抗体，因此聚凝胺法在我国广泛应用 而国外K基因频率为7-9%，用聚凝胺法易漏检，故少单用 肝素聚凝胺有抑制作用 * 微柱凝集试验技术的优点 新型的血型血清学检测技术 易于操作标准化、自动化、判读客观可靠、敏感度高 标本用量少、结果可长期保存、有利于大量样本操作 能检出B（A）或A（B）型而避免误定为AB型 * 微柱凝集试验技术的局限性 成本目前较高，不利于推广 不利于血型专业技术的积累和提高 * 微柱凝集试验技术的注意点 必须使用抗凝标本，否则易引起假阳性 孵育、离心时间较长，不适用于急诊 可能难于鉴别或漏检某些ABO亚型抗原 不适合于直接抗球蛋白试验阳性的RBC样本，也不适合于酶处理的RBC样本的检测工作 RBC悬液中如有颗粒物质，或血浆蛋白异常，干扰实验结果 * 微柱凝集试验技术的应用 ABO、血型鉴定 Rh血型鉴定 交叉配血 不规则抗体筛选 直接抗球蛋白实验 HDN * * Rh阴性的确诊实验 结果判断 确诊实验（－） RhD（－） 确诊实验（+） Du型（弱D） ★ Du型（弱D）作为 受血者：归RHD（－） 　Du型（弱D）作为献血者：归RHD（+） * Rh阴性的确诊实验 吸收放散实验 基因分型技术鉴定 * Rh血型鉴定的方法学评价 Rh血型系统的抗体多由后天免疫刺激（输血或妊娠）产生，故一般不需做反定型实验 Rh定型主要鉴定D抗原，定型时应按抗-D血清试剂的使用说明进行，并注意必须要有严格的对照试验，包括抗原的阴、阳性对照以及试剂对照试验 * Rh血型鉴定的方法学评价 产生假阳性的原因 受检细胞已被致敏，或标