病理学技术概论及常规病理技术精品.ppt

四、组织化学和细胞化学技术 用化学反应原理，在切片上滴加某种化学试剂，使之与组织或细胞中的生物化学物质结合，再用显色剂使之显色，达到定位、定性地显示组织或细胞中的某种物质成分，这种技术称为组织化学和细胞化学技术。其结果可用显微镜和电镜观察。结合定量病理学技术，还可对有关成分定量。 应 用 ?????? 糖类 ?????? 脂类 ?????? 核酸 ?????? 酶类 ?????? 胶原纤维 ?????? 弹力纤维 ?????? 神经纤维 ?????? 细胞膜、核膜结构 五、免疫组织化学技术 概念：免疫组织化学技术是指利用已知的抗 体与组织中相应的抗原结合，并利用 显色剂在原位将抗原物质显示出来 原理：抗原＋抗体＋显色剂 特点：在组织中原位显示某种特异性抗原 常用显色剂种类：酶、金属粒子、同位素 生物素、化学显色剂（DAB） 结果观察：显微镜、透射电镜 基本原理 抗 原 ← 组织中 + 抗 体 ← 试剂 ↓ 抗原抗体复合物 + 第二抗体 ← 标记有显色底物 ↓ 显色反应 ← 显色剂 (DAB) 树突状细胞 S-100阳性 六、超微结构的基本技术 超微结构是在高分辨条件下观察到的细胞膜、细胞核、核仁、核膜、各种细胞器、微绒毛、纤毛、细胞连接结构及胶原纤维、弹力纤维等光镜水平观察不到的细微结构。 （一）透射电镜技术 1. 取材：1×1mm3 2. 固定: 2%戊二醛 2h 1%锇酸 1－2h 3. 脱水：逐级丙酮，环氧丙烷 4. 包埋及聚合：浸透、包埋（Epon812） 聚合（硬化）、时间 5. 超薄切片：超薄切片机 6. 染色：饱和醋酸铀、1％柠檬酸铅 7. 透射电镜观察 （二）扫描电镜技术 1. 取材：1×1mm3 2. 固定: 2%戊二醛 2h 1%锇酸 1－2h 3. 脱水：逐级丙酮，环氧丙烷 4. 干燥：临界点干燥，醋酸异戊酯 5. 喷金： 6. 扫描电镜观察 七、定量病理学技术 形态测量学（Morphometry） 平面测量学（Planimetry） 体视学(Stereology) 形态结构要素计数，如核分裂计数 显微分光光度术 流式细胞术 激光共聚焦显微图像分析 图像分析 体视学 (Stereology) 概念：二维结构信息定量推论三维结构信息 研究内容： 二维定量推论三维的原理、方法及应用， 图像分析原理和方法 生物体视学 (Biological Stereology)： 用体视学原理和方法研究生物组织的三维结构，并据生物组织的结构特点研究相应的体视学测试方法称为生物体视学 特 点 给出量化结果 提高结果表达的客观性和准确性 应 用 ????? 诊断 ?????? 预后分析 ?????? 基础数据 ?????? 三维结构定量分析 ?????? 形态与机能有机结合 八、分子病理学技术 广义概念： 狭义概念： 将分子生物学方法与病理形态学技术相结合，从分子生物学水平原位阐明病变的特点和规律谓分子病理学技术。 原位PCR技术 原位杂交技术 显微切割技术 九、其他病理学技术 ?????? 细胞及组织培养技术 ?????? 细胞及细胞器分离技术 ?????? 显微切割技术 ?????? 显微摄影技术 ?????? 核仁组成区技术 ?????? 荧光染色技术 ?????? 核移植技术 ?????? 酶组织化学技术 ?????? 放射自显影技术 ?????? 流式细胞技术 ?????? 激光共聚焦扫描显微镜技术 目的： 用染料通过不同的方法将切片中的不同组织结构显示出来，以利于镜下辨别其各种不同的形态，做出正确的诊断。 类别： 常