试验1特殊显微镜的原理及其使用.DOC

《细胞生物学实验》 生命科学学院 生物技术系 二O一0年 前 言 生命科学是一门实验科学，实验教学是培养学生创新能力的重要途径。 细胞生物学实验主要为验证性实验，其主要目的是使学生加深理解细胞的形态结构及其生理功能等各方面的知识，掌握细胞生物学实验技术的基本操作和技能，并培养学生分析问题和解决问题的能力以及严谨、求实的科学态度。本着这样的目的，结合我们实验中心的实验条件，我们共设置12个实验，其中开设9个实验。 希望通过本实验的学习，在加深对细胞生物学理论知识的了解和掌握的同时，真正提高学生的动手能力。动手能力实际是一种有更高要求的动脑能力。 实验指导由王秀玲(4,7,8,10,11,12)、聂永心(1,2,9)、周淑梅(3,5,6)三位老师编写。刘鹰高、朱常香、彭清才等老师对本实验指导提出了意见和建议。 2010. 6 目 录 实验一：特殊显微镜的原理及其使用 4 实验二：电子显微镜的原理及使用 8 实验三：细胞膜的渗透性 18 实验四：细胞的凝集反应 20 实验五：诱导细胞融合—聚乙二醇法 23 实验六：线粒体和液泡系的超活染色 26 实验七：叶绿体和细胞核的荧光观察 29 实验八：细胞骨架的观察 31 实验九：细胞中DNA、RNA的显示 33 实验十：细胞培养的准备工作 37 实验十一：细胞的原代培养 42 实验十二：细胞的传代培养 45 实验一 特殊显微镜的原理及其使用 I.暗视野显微镜的原理和使用 一、实验目的 1.了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理； 2.了解暗视野显微镜的特殊组件和位置； 3.掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。 二、原理和结构特点 在日常生活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。暗视野显微镜就是利用此原理设计的。它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗视野聚光器，常用的是抛物面聚光器，使光源的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜。从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像．并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。但被检物体为非均质时，并大于1/2波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004μm以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2μm)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。 三、仪器、材料与试剂 仪器 具有暗视野聚光器的显微镜 材料 牙垢微生物，洋葱内表皮细胞，载玻片，盖玻片，牙签，尖头镊子，滤纸条，指甲油，擦镜纸等。 试剂 生理盐水 四、实验步骤 1.样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，用牙签取牙垢或用镊子撕洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上一片无划痕、清洁的盖玻片，用滤纸条吸取盖片四周多余的水分，用指甲油封片（或不封片）。 2.将暗视野聚光器安装在显微镜上，调强照明光。 3.将标本置于载物台上，插入10x物镜，用调焦螺旋聚焦样品。 4.调节暗视野聚光器位置：这一步是调节暗视野像的关键，包括调节暗视野聚光器的高低位置和中间位置。可反复、缓慢地由低到高或由高到低调节暗视野聚光器的高低位置，聚光器偏高或偏低都将在视野中出现质量不好的影像，只有在合适的位置时，才可出现背景暗、影像亮的暗视野效果；调好聚光器的高低位置后，再通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位