实验十-微生物的分离与纯化.pptVIP

微生物的分离与纯化 微生物的分离与纯化 一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。 微生物的分离与纯化 二、实验原理 从杂居混生的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物生物多样性的重要场所，是发掘微生物的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。 微生物的分离与纯化 三、实验仪器与用具 显微镜、擦镜纸、双层瓶、载玻片、盖玻片、镊子、无菌吸管、玻璃珠、无菌培养皿、恒温培养箱等 四、实验材料与试剂 分离纯化用培养基 微生物的分离与纯化 五、实验方法 1、单细胞挑取法 主要用于获得真菌的纯培养。样品仍然需要经过稀释，在显微镜下，用毛细吸管对准一个单孢子（或单细胞）挑取，放入适宜培养基中培养，这样就获得了纯培养。 微生物的分离与纯化 2、平板分离法 该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理包括两方面： （1）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 微生物的分离与纯化 （2）微生物在固体培养基上形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。 微生物的分离与纯化 六、实验操作 1、 稀释涂布平板法 （1）倒平板 将培养基加热溶化，待冷至50℃，将15~20ml的培养基倒入培养皿中。 微生物的分离与纯化 六、实验操作 2、制备土壤稀释液 取装有9mL无菌水试管五支，用记号笔编上10-2、 10-3、10-4、10-5、10-6 。取已稀释成10-1 的土壤稀释液，用无菌吸管吸取1mL加入10-2的无菌水的试管中，吹吸混匀，使之充分混匀，既成10-2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10-3、10-4、10-5、10-6 稀释液。 微生物的分离与纯化 六、实验操作 （3）涂布 取菌液0.1ml放入已写好稀释度的平板中，静置5~10min，使菌液吸附近培养基，用无菌的玻璃涂布器将菌液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之均匀分布，然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板内边缘处可改变方向用涂棒再涂布几次。 微生物的分离与纯化 六、实验操作 （4）培养 细菌用牛肉膏蛋白胨培养基，真菌用土豆培养基即pda，放线菌用高氏一号培养基 其中放线菌、真菌，28℃培养3~5天； 细菌，37 ℃培养2~3天。 微生物的分离与纯化 六、实验操作 （5）挑菌落 将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基的斜面上，培养，待菌苔长出后，检查其特征是否一致，同时将微生物细胞涂片染色后用显微镜检查是否为单一的微生物，若发现杂菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。 微生物的分离与纯化 六、实验操作 2、平板划线分离法 （1）倒平板 标明培养基名称、土样编号和实验日期。 微生物的分离与纯化 （2）划线 1）连续划线法将挑取有10-1倍土壤悬液的无菌接种环在平板培养基表面做连续划线。完毕后倒置于28-300C培养箱培养。 微生物的分离与纯化 2）分区划线法 用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在培养基一边做第一次平行划线3-4条，再转动培养皿600C，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分进行第二次划线，同法依次做第三第四次划线。划线完毕倒置皿盖，置培养箱培养。 谢谢观赏！！！ 微生物的分离与纯化 六、实验作业 1、如何确定平板上的单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。 2、怎么判断稀释涂布平板计数数据是否可靠？需要掌握几个关键点？