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选修二轮 基因工程 基因工程 1.区分一个至多个限制酶切点与每种酶一个切点 (1)一个至多个限制酶切点:作为运载体必须具有1个至多个限制酶切点,以便与外源基因连接。 (2)每种酶一个切点:每种酶的切点最好只有一个。因为某种限制酶只能识别单一切点,若载体上有一个至多个的该酶切点,则切割后可能会丢失某些片段。 2.从基因表达层面理解基因表达载体的必需元件 (1)表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因+复制原点。 (2)启动子和终止子:启动子是RNA聚合酶结合位点,启动转录;终止子是终止转录的位点。插入的目的基因只是结构基因部分,其表达需要调控序列,因而用作载体的质粒的插入部位前需要有启动子,后需要有终止子。 基因工程 3.目的基因的检测与鉴定方法的比较 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 检测目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 核酸分子杂交技术(DNA和mRNA之间) 检测目的基因是否转录出mRNA 抗原—抗体杂交技术(蛋白质分子杂交) 检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗虫或抗病的接种实验等 个体水平鉴定 基因工程 4.基因工程与蛋白质工程的比较 比较项目 基因工程 蛋白质工程 原理 基因重组 中心法则的逆转 区 别 过程 获取目的基因→构建表达载体→导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测氨基酸序列→合成DNA→表达出蛋白质 实质 定向改造生物的遗传特性,以获得人类所需要的生物类型或生物产品(基因的异体表达) 定向改造或生产人类所需要的蛋 白质 结果 生产自然界中已经有的蛋白质 生产自然界中没有的蛋白质 联系 蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程,对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质必须通过基因修饰或基因合成来实现 1.植物组织培养与动物细胞培养的主要区别 项目 主要不同点 植物组织培养 动物细胞培养 过程 有脱分化、再分化 无脱分化、再分化 培养条件 培养基 固体培养基 液体培养基 营养成分 (1)含蔗糖等 (2)含有植物激素,如生长素和细胞分裂素 (1)含葡萄糖等 (2)加入血清、血 浆等 细胞工程 2.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性 相关酶 纤维素酶和果胶酶 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 融合方法 离心、电激、振动、聚乙二醇 离心、电激、振动、聚乙二醇或灭活的病毒 结果 杂种植株 杂交细胞 意义 克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂种植株 突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能 细胞工程 3.比较动物细胞培养、核移植与动物细胞融合 动物细胞培养 核移植 动物细胞融合 原理 细胞增殖 动物细胞核的全能性 细胞膜的流动性 过程 结果 相同分化程度的细胞群 与供体基本相同的个体 杂交细胞 应用 ①生产生物制品 ②基因工程 ③检测有毒物质 ①加速良种繁育 ②保护濒危物种 ③生产医用蛋白 ④提供克隆器官、组 织等 获得杂交细胞,制备细胞产物如单克隆抗体 4.生产单克隆抗体的两种方法 (1)利用动物细胞融合技术形成的杂交瘤细胞生产单克隆抗体。 (2)将目的基因导入浆细胞,利用基因工程生产单克隆抗体。 归纳拓展 1.胚胎工程的操作流程图 2.胚胎工程中常考的6个“两” (1)两种标志 ①受精的标志:卵细胞膜和透明带之间看到两个极体。 ②受精完成的标志:雌雄原核融合完成。 (2)胚胎移植过程中两次使用激素 第一次是对供受体进行同期发情处理。 第二次用于供体的超数排卵。 (3)胚胎移植过程中两次检查 第一次对收集的胚胎进行检查。 第二次对受体是否妊娠进行检查。 (4)两次冲卵 ①胚胎移植过程冲出的是早期胚胎。 ②体外受精过程冲出的是卵子。 (5)可胚胎移植或分割的两个时期:桑椹胚和囊胚。 (6)胚胎干细胞两个来源:早期胚胎和原始性腺。 细胞代谢 遗传变异 生命活动的调节 生物与环境 二轮概念图 元素与化合物 细胞
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