免疫学实验课件-实验一 微生物培养基的制备2015 11 9.pptVIP

进入微生物实验室的注意事项 1.进入实验室必须穿白大褂 2.实验室内不准吃东西 3.在实验室内不要趴在桌子上 4.实验完成后值日生留下做好清洁工作 5.离开实验室前洗手 6.实验现象要隔天观察的，须按时记录实验现象 实验安排 实验一 微生物培养基的配制和细菌的接种实验 实验二 显微镜油镜的使用及细菌的形态观察 实验三 细菌的药敏实验 实验四 消毒、灭菌，以及环境因素对微生物的影响 实验五 微生物的基因检测分析 实验六 寄生虫形态观察 实验七 实验技术总结及相关视频教学 实 验 一 微生物培养基的制备和细菌的接种实验 （一）实验目的 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程 掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法 掌握细菌的接种方法。 （二）实验原理 培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。 人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。 把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。 自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。 （三）培养基的成份与组成 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 营养物质的浓度要适宜 营养物质之间的配比要适宜 培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。 （四）培养基的种类 1.按组成成分可分为: 合成培养基、半合成培养基、天然培养基 2.按用途分： 基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基 3.从培养基的物理状态可分为： 液体培养基：不加凝固剂 固体培养基：加入2%左右的凝固剂 半固体培养基：加入0.2—0.5%凝固剂 实验室的常用培养基 细菌： LB(酵母提取物/蛋白胨)培养基； 放线菌：高氏1号合成培养基培养； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌： 查氏合成培养基； （五）培养基配制的基本步骤 计算--称量--配置--过滤– 包扎--灭菌--分装 1．计算： 计算各营养物质的组成； 计算所配制培养基的用量： 所需配制的培养基总量= n x 15 (ml) 15代表一个平板需要营养琼脂约15 ml，n代表要做的培养基平板的数量; 计算营养琼脂粉的用量： 固体培养基：2%的营养琼脂粉 半固体培养基：0.2~0.5%的营养琼脂粉 2．称量： 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相应的蒸馏水的量，要尽量准确。 3．溶化： 向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 6.包装与捆扎 注：试管加棉塞(最好) 培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。加棉塞时，应使棉塞长度的2/3在试管口内，如下图所示。 7．灭菌：用高压灭菌器灭菌 将平板培养基整齐地平放入高压灭菌器的内筒中，将试管口盖上棉塞或橡胶塞，用纸包扎好，直立放入内筒中，在121.3℃灭菌20-30min。 灭菌完毕后，将平板培养基拿出平放于桌面，凝固前勿动；将试管培养基摆成斜面，凝固前勿动。 8. 倒平板或倒试管分装 若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右，以刚好覆盖平皿底为易。 若做斜面培养基应倒入试管中，量为试管的1/3 9．无菌检验： 随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小时，若无菌 生长则为合格。 10.培养基的储存与备用： 将合格的平板培养基和试管培养基放入冰箱，在0-4℃中保存备用。 LB培养基的组成 蛋白胨 10g 酵母提取物 5 g 氯化钠 10g 水 100 ml 琼脂 （只用于固体培养基） 2g PH 7.2~7.4 (一)实验材料 药品：酵母提取物、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。 仪器：高压蒸汽灭菌器、细菌培养箱。 其它物品：天平、牛角匙、磁力搅拌仪、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度量杯、量筒、玻棒、三角瓶、蓝盖瓶、试管、培养皿、各种包装纸、高压灭菌带、标签等。 （二）实验程序 培养基的配制 培养基的灭菌方法 细菌的接种实验 1. 液体培养基制作（每位同学各做1支液体培养基，约2ml） 1.按LB液体培养基配方称取相应成分到100ml的蓝盖瓶中； 2. 加入40mL水. 3. 充分溶解. 4. 包装后，进行高压蒸汽灭菌. 5.冷却后，分装，在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基，【注意尽量不要让