第十四章讲-基因重组与基因工程lj.pptVIP

第十四章 基因重组与基因工程;第一节 自然界DNA重组和基因转移;第二节 重组DNA技术;克隆（clone）; DNA克隆(DNA cloning)：应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子—复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子的过程。DNA克隆又称基因克隆（gene cloning）, 基因工程;克隆体系： 目的基因 载体DNA 工具酶 宿主细胞; 1、目的基因（target gene）：cDNA或基因组DNA ; 2、载体(vector)：质粒、噬菌体、柯斯质粒载体、病毒和人工染色体等 ;The constructed plasmid pBR322 ;An example of an E. coli expression vector; 3.1 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease): 存在于细菌体内，能够识别和切割双链DNA内部特定核苷酸序列的一类核酸酶。 ;【经典举例】Eco RI;限制性核酸内切酶;（3）平头钝性末端：如Hpa I; 3.2 DNA聚合酶：大肠杆菌DNA聚合酶I、Klenow片段 (Klenow 酶)、T4 DNA聚合酶以及Taq酶等 ;工具酶 ; 4、宿主细胞：大肠杆菌、酵母、动物细胞 ; 分、切、接、转、筛、表达;一、“分”：目的基因及载体的制备 ;cDNA文库(cDNA library)：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有cDNA信息，总称cDNA文库 。常用于筛选编码蛋白质的结构基因。; 2、常用载体：质粒、噬菌体、病毒DNA ;二、“切”：限制性内切酶切割目的基因和载体DNA ;一、粘性末端连接;DNA片段A ;二、平端连接;重组体构建; 2、转染（transfection）：将外源DNA导入真核细胞的过程 ;五、“筛”：筛选出含重组DNA的受体细胞 ;抗药性标志选择;Screening for desired recombinant by antibiotic resistance genes (clones 2, 5, and 8) ;六、“表达”：使克隆基因在宿主细胞中复制、表达 ;基因工程的基本步骤; 疾病基因的发现、发展新药物、DNA诊断、基因治疗及遗传病的防治 ;基因工程产品;A tobacco plant in which the gene for firefly luciferase is expressed. Light was produced after the plant was watered with a solution containing luciferin, the substrate for this lightproducing enzyme (see Box 13-3, Fig. 2). Dont expect glow-in-the-dark ornamental plants at your local nursery anytime soon; the light is actually quite weak and this photograph represents a 24 hour exposure. The real point-that this technology allows the introduction of new traits into plants-is nevertheless elegantly made. ;基因工程的应用; 三、基因诊断;小结