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动物细胞融合与单克隆抗体学案 学习目标： 1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同 2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义。 3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用 学习重难点： 1.动物细胞融合的原理、过程和意义。 2.单克隆抗体制备的过程的步骤和应用 学习过程： 【知识回顾】 1.植物细胞工程涉及的技术： 2.植物体细胞杂交技术的过程及意义： 3.动植物细胞在结构的区别： 3.浆细胞的产生及功能 4.瘤细胞的特点 【自主探究】 一.动物细胞融合（又叫：细胞杂交）： 1．概念：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 2．杂交细胞：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 3．动物细胞融合原理：　　　　　　　　　　　　　　　　 4．诱导动物细胞融合的方法： 　　物理方法： 　　化学方法： 　　生物方法： ※ 灭活：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ※ 灭活病毒诱导细胞融合的原理：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 5．优点：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 6．用途：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 注意：动物细胞的融合与植物细胞相同，也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。 二.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较： 比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用途 培养基区别 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合 离心、电刺激、振动、聚乙二醇（PEG）诱导 克服远源杂交不亲和，获得杂种植株 蔗糖是离体组织赖以生长的成分 动物细胞融合 细胞膜的流动性 用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合 除应用植物细胞杂交手段外，还有用灭活病毒诱导 制备单克隆抗体 动物血清不可缺少 思考：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。 三.单克隆抗体 1.传统获取抗体的方法： 采用的方法：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 这种方法的缺陷是： 2.医疗实践中仅靠细胞培养难以获得大量抗体的原因： 动物在免疫反应过程中，体内产生的 种类可多达百万种以上，但是 。因此，要想获得大量的 ，必须 ，形成 。遗憾的是，在体外培养条件下，一个 。 解决这一问题的方法是 。 3. 单克隆抗体 　（1）概念：由单个B淋巴细胞进行无性生殖形成的细胞所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。 （2）选取的细胞： B淋巴细胞的特点：________________，缺点：__________________ 骨髓瘤细胞的特点：_________________________ ________。 　（3）单克隆抗体的制备： 　　　第一步：将　　　　注射到小鼠体内进行免疫； 　　　第二步：从该小鼠脾脏中获得能够产生抗体的　　　　　　　细胞，与小鼠的　　 　　　　　　　　　　　　　　细胞用　　　　　　　或聚乙二醇的诱导下融合； 思考：①为什么选用小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？ （细胞的同源性越接近，融合形成的杂种细胞越易成活） ②此时，培养液中会有哪几种细胞？ （5种，单个的B淋巴细胞、单个的骨髓瘤细胞、融合的B淋巴细胞、融合的骨髓瘤细胞、融合的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞） 　　　第三步：在特定的　　　　　培养基中，筛选出　　　　　细胞； 原因：在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有　 才能生长 　　　第四步：培养杂交瘤细胞，从中挑选出　　　　　　　　　　　　　　　　的细胞群，继续培养； 　　　第五步：将该杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到小鼠