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在高pH下使用AgilentPoroshellHPH
在高 下使用 pH Agilent Poroshell HPH-C18 色谱柱作为方法开发的工具 技术概述 前言 开发出适合化学分析和药物分析的HPLC 方法是一项极具挑战性的任务。为获得足够的 分离度并实现稳定分离，涉及到对各种色谱参数的筛选。尽管开发方法的途径有很多， 比如一次一因子实验法，以及质量源于设计 (QbD) ，不过优化分离的目标和因子还是相 同的。有很多因素影响色谱分离度 ，如效率 （ ，取决于粒径、粒子形态以及色谱 (RS) N 柱长度）、保留因子 （，取决于溶剂强度）和选择性 （，取决于键合相和流动相）的 k a （图 ），其中选择性 是最重要的因素。 1 a 7.00 6.00 5.00 4.00 N a 3.00 k 2.00 1.00 0.00 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 5000 10000 15000 20000 25000 a: 1.10 1.35 1.60 1.85 2.1 k’: 2.0 4.5 7.0 9.5 12.0 N (a − 1) k R = S 4 a (k + 1) 图 典型的方法开发参数；选择性、效率以及保留时间对分离度 1. 的影响 表 保留相关性实验中用到的化合物 方法开发涉及到简单及复杂混合物的分离。选择性受固定相、有 1. 机改性剂类型、梯度斜率、流速以及温度等多个因素的影响。对 1,2- 于可离子化的化合物来说，缓冲液的 值也是一个重要参数。 pH 1.2- 优化可离子化化合物的分离以寻找稳定条件已经成为液相色谱方 1,2,3- 4- 1,2,4- 法开发的重要组成部分 。大部分制药和生物化合物都含有可离 1,2,5- [1] 1.3- 子化的官能团 （如羧基或氨基）。在反相液相色谱(RPLC) 分离方 1,3- 面，使用 是一种增加选择性的有效工具。低 下可分离质子 1.4- pH pH 2.3- 1330 化的酸和碱，但是高 条件下这些酸与碱会去质子化。分析物 2.4- pH
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