心肌细胞内游离钙的检测 取Petri皿进行心肌细胞培养.doc

心肌细胞内游离钙的检测 取Petri皿进行心肌细胞培养，分组处理后，加入终浓度为8μM的Fluo-3/AM，37℃避光孵育45min，PBS液洗涤2次，采用单盲法行激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的荧光强度。每组选择八个不同视野扫描细胞图像，利用分析软件选择30个细胞分析细胞内游离钙的平均荧光强度。 台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒 产品编号：AR1175 Lot ：06I20B75 规格：100次 价格：80元 组成： 台盼蓝染色液(2X) 10ml 细胞稀释液 100ml 保存条件： 4℃保存，一年有效。 产品简介： 作为细胞染色剂之一的台盼蓝（Trypan Blue）已被证明受到活体细胞的排斥，而死亡细胞摄入染料显示蓝色。通过常用的光学显微镜可以观察到细胞染色情况，同时可以定量计数，但是该染色无法定性区别自杀细胞还是坏死细胞。 博士德生产的台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit），是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色。通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。 台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 注意事项 1．本产品为100次操作 2．建议待测细胞样品最好为每毫升1 X 106细胞浓度左右 3．避免台盼蓝染色时间过长，否则由于其毒性导致细胞死亡 4．本产品可直接染色生长中的贴壁细胞。 5．细胞计数时乘上稀释倍数104。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是： 1毫米方块的细胞计数X 104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升 使用说明： 1. 收集细胞： 对于贴壁细胞先用胰酶和/或EDTA消化下细胞； 对于悬浮细胞，则可以直接收集细胞。把收集的细胞在1000-2000g离心1分钟，弃上清； 收集细胞悬液，用细胞稀释液适当稀释；或离心弃上清，估测细胞数量，向沉淀中适量加入细胞稀释液，吹打重悬细胞。 2. 台盼蓝染色： 吸取100微升细胞悬液到EP管内，加入100微升台盼蓝染色液(2X)，轻轻吹打混匀，3-5分钟(染色时间不宜过长)后滴板计数。 3.细胞存活率分析 吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液，滴加血细胞计数板计数。于大方格内分别计数细胞总数和蓝染细胞数。 细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数X100%。