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第一章 血液一般检查 一、红细胞计数(red blood cell count) [要求] 通过实习较熟练地掌握末梢采血技术，熟悉细胞计数板的结构及用法，能进行红细胞计数，并记住参考值、临床意义。 [原理] 一定量的血液，经一定量的等渗性溶液稀释后，充入血细胞计数室中，于显微镜下计数一定体积的红细胞，并求的每升血液内红细胞数。 [仪器试剂] 1.血细胞计数板，为一特制的长方形硬质玻璃板，中间1/3部分具有“H”形漕沟，横漕沟上下的平台部分各深0.1mm，成为二个计数台（池），每台有一个计数区域，分为9个大方格，每一个大方格的面积为1mm2，四角的每个大方格又划分为16个中方格，供白细胞计数用。中央的一个大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共为400个小方格，供红细胞计数用。计数台之上覆以特制的盖片（厚度0.4mm、表面平直、质地较硬）后构成计数室。每个大方格的体积是0.1mm3(1mm×1mm×0.1mm)，参阅图1，2，3 图1 血细胞计数池正面图 图2 血细胞计数池侧面图 图3 血细胞计数池划线 2.容量准确的微量吸管（具有10 ul及20 ul刻度） 3.红细胞稀释液（Hayem稀释液） 氯化钠 1.0g 硫酸钠（Na2SO4.12H2O） 5.0g 氯化高汞 5.0g 蒸馏水加至200ml过滤后备用 此稀释液为等渗性溶液，比重较大，使红细胞易于悬浮，并有防腐作用。 4.光学显微镜。 5.消毒、穿刺用具为75%酒精棉球、干棉球、消毒刺血针。 [方法] 1.准确加红细胞稀释2ml于一中号试管中，塞紧管口，并拭净血细胞计数板及盖玻片。 2.用75%的酒精棉球消毒被检人左手无名指尖侧腹部。 3.待酒精挥发后，由左手捏紧取血部位，以右手持消毒穿刺针快速刺入约2~3mm深。拭去第一滴血后，用微量吸管准确吸血到10ul处，拭去管尖余血，将吸管插到稀释液中迅速的把血液放出，并用上清夜洗净洗管内残存血液，立即轻轻振荡混匀，用消毒干棉球按压穿刺伤口。 4.进一步混匀红细胞悬液，然后用尖吸管吸取数滴（或用细玻璃醮取一滴），充入计数室内准备计数。充细胞悬液时应防止产生气泡，要一次充好，液量多少适宜。水平位静置2~3min待细胞沉下。 5.将计数板平放于显微镜载物台上，用低倍镜找出红细胞计数区域，如红细胞分布均匀即可于低倍镜下进行计数。计数中央大方格中的四个角和中心的五个中方格内的红细胞。为保证计数的准确，凡在中方格双线上的红细胞按压左侧及上侧线者计入，按右侧及下侧线者弃去的原则进行计数（图4） 图4 红细胞计数方式 6.将五个中方格内红细胞数×5×10×200×106=5个中方格内红细胞数×1010=红细胞数/L，报告方式：△、△△1012/L。 上式中 ×5表示把5个中方格内红细胞数折算为1个大方格的红细胞。 ×10表示把一个大方格容积(0.1ul)折算成1ul。 ×200表示血液稀释倍数。 ×106表示将ul换算成L。 △△1012/L表示将红细胞数以小数点前保留1位数字乘以1012形式报告。如数得红细胞为450个则报告为4.5×1012/L。 [注意事项] 1.取血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀或冻疮等均不可穿刺采血。 2.一人一针，防止交插感染。穿刺必须够深，使血液自行流出或仅施压力即可流出。 3.微量吸管的容量必须准确，内腔一定要干燥，否则会影响吸血量和导致溶血。 4.取血动作必须迅速，否则常易凝固。若作血红蛋白或红细胞计数两项时，应先取红细胞计数的标本，后取血红蛋白的标本。 5.充液之前务必充分混匀，否则因久置而红细胞下降，导致计数值错误的偏低。 6.一般于低倍镜下计数即可。为区别异物或残渣，将可疑目标置低倍镜视野中心，然后转高倍镜观察。 7.在红细胞稀释中，白细胞仍然存在。但因在正常人血液中,红细胞于白细胞之比是750：1，又经200倍稀释故对红细胞计数影响不大。但如遇白血病患者，其白细胞明显增多时，则应进行校正，可从上法所得的红细胞数值（内含较多白细胞）中减去白细胞计数值。 8.如遇高球蛋白血症病人，其血液加稀释液后，迅速出现颗粒状混浊，乃因氯化高汞将球蛋白沉淀所致。此时可换用生理盐水作稀释液，但应及时计数。 9.如遇含高效价冷凝集素的病人，当血加入稀释液后，其红细胞即凝集成红色颗粒状，此时应事先将红细胞稀释液管加温后再放入血液或将红细胞悬液管置温箱内待冷凝现象消失后再迅速混匀计数。 [参考值] 成年男性（4.0—5.5）×1012/L 成年