土壤酶试验.docVIP

试验一β-葡萄糖苷酶活性测定溶液MUB）贮备液：12.1g三羟甲基氨基甲烷（C4H11NO3即Tris）、11.6g马来酸（C4H4O4）、14g柠檬酸（C6H8O7）和6.3g硼酸（H3BO3）溶于500ml 1mol.L-1 NaOH溶液中，用去离子水稀释至1L，于4℃下贮存。 pH值6.0的MUB缓冲溶液PNPG）溶液Cacl2溶液Cacl2 55.49g加入1L的容量瓶中配置 Tris缓冲液1)取5.00g新鲜土样2mm)于50ml三角瓶中，加1.25ml甲苯，20.00mlMUB溶液和5.00mlPNPG溶液，盖上瓶盖，充分混匀，在37℃培养1h。 2)加5.00ml Cacl2溶液和20.00ml pH值12.0的ris缓冲液，摇匀，迅速用快速滤纸过滤，滤液在400nm处比色测定。做空白对照时，必须在培养结束后，加Cacl2溶液和tris缓冲液之前加入底物PNG溶液。每个样品必须做一个空白和三次重复。 3)标准曲线：取1ml对-硝基酚标准溶液于100ml容量瓶中，用去离子水定容至刻度，再分别取该稀释液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0ml于50ml容量瓶中，加去离子水稀释至5ml，然后加4ml氯化钙溶液和4ml氢氧化钠溶液，充分混匀后过滤，400nm处比色测定培养结束后， Cacl2溶液和tris缓冲液之前加入结果计算 β-葡萄糖苷酶活性（μg对-硝基酚 .g-1.h-1）=CV/dwt 式中：C表示样品对-硝基酚的含量（μg/ml）； V表示土壤溶液体 Dwt表示烘干土壤质量磷酸酶活性测定溶液MUB）贮备液：12.1g三羟甲基氨基甲烷（C4H11NO3即Tris）、11.6g马来酸（C4H4O4）、14g柠檬酸（C6H8O7）和6.3g硼酸（H3BO3）溶于500ml 1mol.L-1 NaOH溶液中，用去离子水稀释至1L，于4℃下贮存。 pH值6.5或11.0的MUB缓冲溶液PNPP）溶液Cacl2溶液Cacl2 55.49g加入1L的容量瓶中配置（试验一配置够用） 氢氧化钠溶液1)取1.00 g新鲜土样2mm)于50 ml三角瓶中，加入0.25ml甲苯，4.00 ml MUB缓冲液（酸性磷酸酶用H为6.5缓冲液，碱性磷酸酶用p为 11.0的缓冲液）和1.00 ml用相同缓冲液配制的对-硝基酚磷酸钠溶液，盖上盖子混匀，在37℃下培养1h 2)加入4.00 ml氯化钙溶液和4.00 ml氢氧化钠溶液，充分混匀后过滤，400 nm处比色 同时做空白对照，加对-硝基酚磷酸钠溶液之前加入氯化钙溶液和氢氧化钠溶液，并迅速过滤。每个样品重复三次 3)标准曲线：取1 ml 对-硝基酚标准溶液于100ml 容量瓶中，用去离子水定容至刻度，再分别取该稀释液0，1，2，3，4，5ml于容量瓶中，加入去离子水稀释至5ml，然后再加4ml氯化钙溶液和4ml氢氧化钠溶液，充分混匀后过滤，400nm处比色测定 结果计算 土壤磷酸酶活性μg对-硝基酚.g-1.h-1=CV/dwt 式中：C表示样品对-硝基酚的含量μg/ml)； V为土壤溶液体积ml)； Dwt为烘干土壤质量g) 试验三脲酶活性测定0%尿素液柠檬酸盐缓冲液Cl原子量35.5,活性氯比例为47%(1)氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。绘制标准曲线时，可再将此液稀释10倍供用。(2)标准曲线：吸取稀释的标准液1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中。然后加蒸馏水至20ml。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于波长578nm处比色。根据光密度值与溶液浓度绘制标准曲线。 (3)取5g风干土，置于50ml三角瓶中，加1ml甲苯。15min后加10ml10%尿素液和20mlpH为6.7柠檬酸盐缓冲液。摇匀后在37℃恒温箱中培养24h。过滤后取3ml滤液注入50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定然后加蒸馏水至20ml20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于波长578nm处比色。结果计算：脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的毫克数表示。 NH3-N (mg) =2×a 式中 a-从标准曲线查得的NH3-N毫克数 2-换算成1g土的系数过氧化氢酶活性测定[104]1%邻苯三酚溶液邻苯三酚柠檬酸-磷酸缓冲液pH4.5）：根据缓冲液配置表（见实验指导书）查得，取10.915 ml甲液（0.1mol.L-1柠檬酸溶液）与9.085 ml乙液（0.2mol.L