[小学教育]基因工程的载体.pdf

三、基因工程的载体 三、基因工程的载体 （一）载体的功能及特征 （二）大肠杆菌载体 （三）酵母载体 （四）植物载体 （五）动物载体 （一）载体的功能及特征 载体：将外源DNA携带进入宿主细胞的工具。 载体的功能 运送外源基因高效转入受体细胞； 为外源基因提供复制能力或整合能力； 为外源基因的扩增或表达提供条件。 载体的分类 载体的分类 依据载体的生物来源分为： 依据载体的生物来源分为： 病毒载体 病毒载体 非病毒载体 非病毒载体 根据载体的用途分为： 根据载体的用途分为： 克隆载体 克隆载体 表达载体 表达载体 按照导入的受体生物分为： 按照导入的受体生物分为： 大肠杆菌载体 大肠杆菌载体 酵母载体 酵母载体 植物载体 植物载体 动物载体 动物载体 基因载体必须具备的特征条件： 对受体细胞的可转移性。 对受体细胞的可转移性。 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或 整合位点。 整合位点。 具有多种单一的核酸酶识别位点。 具有多种单一的核酸酶识别位点。 具有合适的选择标记。 具有合适的选择标记。 分子量较小，多拷贝。 分子量较小，多拷贝。 （二）大肠杆菌载体 大肠杆菌载体主要有： 大肠杆菌载体主要有： ①质粒载体； ①质粒载体； ②噬菌体载体； ②噬菌体载体； ③柯斯（粘粒）质粒 ③柯斯（粘粒）质粒 1. 质粒载体 1. 质粒载体 质粒是存在于细菌细胞质中独立于染色体而自主复制的共 价、封闭、环状双链DNA分子（Covalently closed Circular DNA, ccc DNA），1-200kb以上。 并不是细菌生长所必需的，但可以赋予细菌某些抵御外界 环境因素不利影响的能力。 自身在细菌细胞中能不断复制繁殖,质粒DNA能从细菌中提 出来，又能再转入细菌，这个过程称转化。转入的质粒 DNA仍能进行复制，这种性能为DNA重组技术提供了重要的 条件，即将一种外源基因与质粒重组后，再转入细菌中去 复制繁殖，使外源基因得以增殖。 大肠杆菌质粒分子结构 大肠杆菌质粒分子结构 （1 ）质粒的分类 （1 ）质粒的分类 ①根据赋予的宿主的遗传性状分： ①根据赋予的宿主的遗传性状分： F因子（性因子） F因子（性因子） R质粒（抗性因子） R质粒（抗性因子） Col质粒（产大肠菌素因子） Col质粒（产大肠菌素因子） ②根据质粒的可转移性可分成两大类： 接合型质粒：天然条件下自发地进行细胞间接合。 非接合型质粒：不能在天然条件下独立地发生接合。 ③根据复制控制类型分类 根据在每个细胞中的分子数（拷贝数）多 寡，质粒可分为两大复制类型： 严紧型复制控制的质粒 1-3 拷贝 松弛型复制控制的质粒 10-200 拷贝 在基因工程中，为提高工程菌表达效率，一般 选用松弛型复制控制的质粒。 （2 ）质粒的基本特性 1) 自主复制性 2) 不相容性 3) 可扩增性 4) 可转移性 5) 携带遗传标记 野生型的质粒DNA上往往携带一个或多个遗传 标记基因，这使得寄主生物产生正常生长非必需 的附加性状，包括：抗生素、抗抗生素、抗重金 属、产生细菌毒素等。对DNA重组分子的筛选具有 重要意义。 （3 ）质粒DNA 的转移 质粒DNA 的转移和复制 5 3 35 1）质粒转移的必备条件 ⅰ.转移起点(oriT),它是质粒DNA转移时的复制起点— 顺式 作用（cis-