(精选)【医学课件课件大全】 血清型教学课件.ppt

3、Gc型的命名 1978年召开的Gc系统国际专题会议上 统一命名方法：用等电聚焦技术检测Gc变 异型时，凡双带变异属Gc1变异，单带变 异属Gc2变异。 出现在Gc1S正极侧的为Gc1A带，出 现在Gc1S负极侧的Gc1C带；同理，出 现在Gc2正极侧的为Gc2A带，负极侧的 为Gc2C带 三、群体遗传学调查结果 Gc亚型的基因频率分布在不同人种间 分布有区别，高加索人：Gc*1S Gc*2 Gc*1F；蒙古人种Gc*1F占 优势；黑种人群体中Gc*1F出现的频率 很高 四、Gc的分型原理及方法 普通型可用免疫电泳或聚丙烯酰胺凝胶 圆盘电泳分型；亚型则需用等电聚焦技 术分型或采用DNA分型技术 1、免疫电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳 3、等电聚焦技术 4、PCR扩增技术 ? 免疫电泳(immunoelectrophoresis, IEP)是将 区带电泳和双相琼脂扩散相结合的一种免 疫化学分析技术。1953年Grabar首先应用 该方法进行抗原抗体分析。 原理 先将待检标本在琼脂凝胶中进行电泳,不同的抗原成分由于所带电荷、分子量及分子构型的差异，在电场作用下的泳动速度不同而被分成不同区带。然后与电泳方向平行，挖一小槽，加入含相应抗体的免疫血清，与已分离的各抗原成分在琼脂内作双相免疫扩散，各区带在相应位置与抗体形成沉淀弧。根据沉淀弧的数量、位置和形态，可分析样品中所含抗原成分及其性质。 图1 免疫电泳原理图解 操作步骤 1. 取洁净载玻片，浇注融化的琼脂凝胶，凝固后打孔挖槽。 2. 用微量加样器加待检标本于孔内。 3. 电泳条件以电压4~6V/cm或电流2~3mA/cm为宜，电泳1.5~2h。 4. 电泳完毕后，用毛细滴管在槽内加入含相应抗体，孵育，使抗原抗体双相扩散，形成沉淀线。 5. 观察沉淀线的数目、形状和位置。经漂洗、干燥、染色、脱色等步骤制作染色标本，可长期保存。例如血浆蛋白免疫电泳。 方法评价 免疫电泳分辨率高，可分出人血清中 20~30种抗原成分，可鉴定混合抗原中各 组分。 注意事项 （1）浇载玻片时，玻片应保持水平，琼脂面要尽量铺平 （2）加样应一次加满，并防止样品溢出孔外 （3）电泳过程中注意防止发热，以免影响电泳结果 由于免疫电泳的影响因素较多，对异常结果的 分析增加了复杂性。如沉淀弧数目不总是与混 合物中应有的成分相符。 原因有：① 抗原抗体比例不恰当，使一些成分未出现 沉淀线；② 相邻两抗原迁移率非常接近而致沉淀线重 叠；③ 一条沉淀线分离成多条。 因此用免疫电泳技术检测多种混合物时，至少要用3种 不同的浓度，2种或2种以上的抗体(免疫不同动物而得) ，而且要及时观察并记录沉淀弧出现的情况。 Gc的免疫电泳分型：以含乳酸钠的巴比妥 作为缓冲液，离子强度为0.05，将血清加 在琼脂糖凝胶板负极测，电场强度为 7V/cm，电泳2h后，在与电泳方向相平行 的泳道旁开槽，加抗－Gc血清，于室温下 放置24－48h后观察沉淀线 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE)是利用聚丙烯酰胺凝 胶作为支持物的电泳法，聚丙烯酰胺凝胶是由单 体丙稀酰胺和交联剂甲叉双丙稀酰胺交联而成的 多孔网状凝胶。 不连续PAGE有分离胶、浓缩胶和样品胶。 PAGE分辨率很高。 二、聚丙烯酰胺凝胶电泳法 凝胶系统的均匀性： 　　　　　　　连续性凝胶电泳 　　　　　　　　不连续凝胶电泳 按凝胶形状： 　　　　　　圆盘状电泳 　　　　　　　平板电泳 被分离的物质是否变性： 　　非变性、变性（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ） 　　　　　图1 聚丙烯酰胺凝胶不连续圆盘电泳示意图　　　　　　　　(A为正面,B为剖面)　1样品胶pH6.7 　2浓缩胶：是大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1　3分离胶；是小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1　4电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液 电泳过程示意图 A:为电泳前3层凝胶排列顺序，3层胶中均有快离子，慢离子 B:显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄  的区带。 C:显示蛋白质样品分离成数个区带。 操作方法 分离胶的制备 浓缩胶的制备 加样 待分离样品的制备 电泳 剥胶 固定染色、洗脱 Gc的聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳条件：凝胶 浓度为5.8％、交联度为2.14％。Tris-甘氨 酸缓冲液作为电极液，于3mA下电泳2h， 普通蛋白染色，Gc位于白蛋白与转铁蛋白 之间。 将两性电解质(eg:pH3-9，pH5-7)同蛋白质 样品一起加入到已经灌好的凝胶中，在电 场下，两性电解质首先达到它的等电点而 平衡，蛋白质样品根据它自身的等电点分 别向两极移动，最后