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色谱法基本理论 色谱分离过程的两个特点： 不同组分在通过色谱柱时移动速度不同，使各组分得以分离； 各组分分子在色谱柱内的扩散分布，从而引起峰变宽。 色谱法基本理论就是研究物质在色谱过程中的运动规律，如解释色谱流出曲线的形状、谱带展宽的机理，从而为选择色谱分离条件提供理论指导。 比较典型的由两种理论：塔板理论和速率理论 塔板理论的特点和不足 （四）. 速率理论的要点 也称选择性因子，其定义为相邻两种难分离组分2与组分1的校正保留时间之比。 α＝t’R2 / t’R1 ＝V’R2 / V’R1 ＝k’2/k’1= K2/K1 α值表示两个峰在色谱图上的相对位置。 α值越大，两组分越容易分离。习惯上，t’R2 t’R1，故α值一般大于1。 试根据分离度方程，说明影响分离度（Rs）的因素。 答：分离度方程为：　　　　　　　 　　 该方程推导出分离度与相对保留值(α)、理论塔板数(n)和分配比(k)三个基本参数之间的关系，根据计算得知，影响分离度的三个参数中，α的增加对分离的改进最有效，k从1增加到3，R只增加到原来的1.5倍．n增加到原来的3倍，而R只增加到1.7倍．而α从1.01增加到1.1，约增加9%，而Rs却增加到原来的9倍． 答：由于组分的峰面积与其重量或百分含量不成正比，也就是说，在同一类型的检测器上，重量或浓度相同的不同物质，在同一条件下，产生的信号是不一样的（得到的色谱峰面积却常常不同）；在不同类型的检测器上，同一种物质产生的信号也是不一样的．因此，为使产生的响应信号（测出的峰面积）能定量代表物质的含量，就要对峰面积进行校正，即在定量计算时要引入校正因子。 概念、表示方法及计算公式汇总 表-1 表-2 第五节 色谱定性和定量分析 1.利用纯物质定性的方法 利用保留值定性：通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。 利用加入法定性：将纯物质加入到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。 2.利用文献保留值定性 相对保留值αi,s：相对保留值αi,s仅与柱温和固定液性质有关在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保留数据，可以用来进行定性鉴定。常用正丁烷、正戊烷、苯、环己烷等为基准物。 3.与其他分析仪器联用的定性方法 小型化的台式色质谱联用仪（GC-MS；LC-MS） 色谱-红外光谱联用仪； Sample Sample 5890 1.0 DEG/MIN HEWLETT PACKARD HEWLETT PACKARD 5972A Mass Selective Detector D C B A A B C D Gas Chromatograph (GC) Mass Spectrometer (MS) Separation Identificaon B A C D 二、定量分析 定量依据： 每个组分的量与色谱检测器的响应值成正比，一般与峰高或峰面积响应成正比 峰高（h）乘半峰高宽（2ΔX1/2）法： A=1.065 h×2ΔX1/2 定量方法 校正因子 试样中各组分质量与其色谱峰面积成正比，即： m i = fi ·Ai 绝对校正因子：比例系数f i ，单位面积对应的物质量：f i =m i / Ai 相对校正因子f ’i ：即组分的绝对校正因子与标准物质的绝对校正 因子之比。 相对校正因子值只与被测物和标准物及检测器类型有关，与操作条件无关。常用标准物，对热导池检测器是苯，对氢焰检测器时正庚烷。 色谱定量分析时，为什么要引入定量校正因子？ * 第三节 色谱法基本理论 试样由流动相携带进入色谱柱与固定相接触，被固定相溶解或吸附。 随流动相不断通入，被溶解或吸附的组分又从固定相中挥发或脱附， 挥发或脱附下的组分随流动相向前移动时又再次被固定相溶解或吸附。 随流动相的流动，溶解、挥发，或吸附、脱附的过程反复地进行。 组分A、B在沿柱移动时不同位置处的浓度轮廓 KAKB A B A B B A 使A、B完全分离必须的条件： （1）两组分的分配系数必须有差异； （2）区域扩散速率必须小于区域分离速率； （3）在保证快速分离的前提下，提供足够长的色谱柱。 塔板理论 假设： 1、在色谱柱内，物质在两相之间的平衡虽然不能在瞬间完成，但从统计学角度可认为平衡能在一小段内完成。小段的柱长称理论塔板高度（Ｈ）。 2、假设流动相通过色