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新型微生物检测技术 胶体金免疫层析检测条技术 常见的胶体金免疫层析检测条 原理： 根据萤火虫发光原理，在有氧的条件下，虫光素酶催化D-荧光素和ATP之间发生氧化反应，形成氧化荧光素并发出荧光，其生化反应式如下： ATP＋ D-荧光素＋O2————AMP＋氧化荧光素＋PPi＋CO2＋荧光 常见的荧光检测仪 ATP荧光法检测微生物特点： 可实现精准、稳定、快速检测微生物总数的需求，但设备比 较昂贵，对仪器的清洗保养要求特别高。检测时需做预处理，去除胞外游离ATP 。 微生物检测技术的应用及其实例 一、医学检测 常见的微生物感染疾病： 已有固定的检查方法 不确诊的微生物感染疾病： 传统经典方法和现代微生物技术进行鉴定 超级细菌 超级细菌2009年首先发现于印度新德里, 该细菌携带NDM- 1基因，几乎对所有抗生素具有抗性。因此, 超级细菌的出现为人类抗生素的滥用敲响了警钟。 目前检测超级细菌主要用基于PCR基础的检测方法超级细菌NDM- 1基因。 如环介导等温扩增法可以在恒温下1h内将核酸扩增到109拷贝, 具有操作简单、快速 、 特异性强等特点。 二：食品检测 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品 前增菌法 25g＋BPW225mL 36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h 10mL＋MM （或TTB）100mL 10mL＋SC100mL 直接增菌法 25g＋灭菌生理盐水25mL 检样匀液25mL ＋MM （或TTB）100mL 检样匀液25mL ＋SC100mL BS DHL（或HE、WS、SS） TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸 H2S＋ 靛－ 尿－KCN－ 赖＋（或一项不符） 沙门氏菌血清学试验 甘露醇+ 山梨醇+ H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋ H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－ 非如左述的各种反应结果 沙门氏菌血清学试验 ONPG － 沙门氏菌 非沙门氏菌 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 40h～48h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h * 现代微生物检测技术 09级基地二班 冯俊霞 邹梓姣 李梅香 龙文英 刘芬芳 杨成志 主要内容 认识微生物 微生物污染 常用微生物检测技术 新型微生物检测技术 微生物检测的应用及实例 认识微生物 微生物：形体微小，结构简单的低等生物的统称。 包括病毒、细菌、放线菌、真菌··· 特点： 种类多 分布广 繁殖快 适应性强 易变异 药品 食品 环境 ······ 食品 据世界卫生组织估计，全世界每年有数以亿计的食源性疾病患者中，70%是由于各种致病性微生物污染导致的。 我国每年发生的细菌性食物中毒事件占食物中毒事件总数的30%～90%，中毒人数占食物中毒总人数的60%～90%。 药品 据报道,1970年7月至1971年3月,美国25家医院由于输注了细菌污染的葡萄糖致使378个患者得败血症,40人死亡。 我国也在1991至1993年因人血白蛋白污染,输注发生了46例感染事件,死亡8例。 环境 肺结核、百日咳、流行性感冒 等疾病的传播 空气污染 沙门氏杆菌病 霍乱 胃肠道疾病 水体污染 其他污染 土壤 化妆品 航空燃料 ······ 如何及时、有效的检出微生物？ 常用的微生物检测技术 1.常规的检测方法 平板分离、镜检、生化试验等 2.免疫学方法 免疫荧光标记 酶联免疫吸附实验（ELISA) 自动酶标免疫检测仪 3.分子生物学方法 核酸探针 PCR技术 基因芯片技术 4.联合检测方法 :PCR-ELISA、IMS-PCR等。 5. 物理学方法 电阻抗技术、微热量计技术、放射测量技术