钱中直---方法学验证-2.ppt

中国药典2005版一部新增指导原则 中药分析方法验证实验项目 中药方法学验证的特点 反映被测成分与辅料间的影响与试验操作误差 反映测定全过程误差的总和,特别包括其中提取、分离、转化反应等前处理过程所带来的误差 由于中药所含成分复杂、含量偏低，试验步骤较多，测定难度会更大，对精密度等影响会更大，一般难以达到常见的如化学药品的要求，且随着含量的高低和分离步骤的多少，可达到的要求会不同。 验证的目的 证明采用的方法是否适合于相应的检测方法 新建立的检测方法、改变原检测方法、工艺变更、处方变更等均须验证 验证过程和结果均应记载在标准起草或修订说明中 需验证的分析方法类型 鉴别 限量检查 含量测定 溶出度、释放度 需控制的残留物、添加物等 分析方法验证 项目 试验方法 数据要求 准确度(Accuracy) 准确度(Accuracy) 准确度(Accuracy) 准确度(Accuracy) 准确度(Accuracy) 准确度(Accuracy) 准确度(Accuracy) 准确度(Accuracy) ? 精密度（Precision） 重复性(Repeatability) 重复性(Repeatability) 实验要求： 在规定范围内，取同一浓度的样品，用6个测定结果进行评价； 或设3个不同浓度9份样品，用9个测定结果进行评价（高低浓度可以结合范围的考察设计，中间浓度为样品平均浓度，计算9份样品的相对标准偏差） 重复性(Repeatability) 测定数据的精度要求： 一般应满足以下规定 相对标准偏差(RSD%)TLCS＜5%，HPLC/GC＜3%。 重复性(Repeatability) 结果表明六份同浓度值与九份不同浓度值的相对偏差为1.11％，九份不同浓度的RSD高于六份同浓度的RSD。 中间精密度(Intermediate precision) 重现性(Reproducibility) ? 专属性（Specificity） 专属性（Specificity） 专属性有以下含义： 鉴别：确证被测物是否符合其特性。 检查：确保采用的分析方法可检出被测物中杂质或应控制物的准确含量，如有关物质、有毒成分、重金属、溶剂残留量等。 含量测定：提供样品中被测物含量的准确结果。 专属性（Specificity） 鉴别 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。不含被测成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均不得干扰测定 显微鉴别、色谱光谱鉴别等应附相应的代表性图象或图谱。 专属性（Specificity） 含量测定和限量检查 色谱法和其他分析方法，应附代表性图谱，以不含被测成分的供试品（除去含待测成分药材或不含待测成分的模拟复方）试验说明方法的专属性。并标明相关成分在图中的位置，色谱法中的分离度应符合要求。必要时可采用二极管阵列检测或质谱检测进行验证 专属性（Specificity） 检测限（Limit of Detection，LOD) 检测限试验方法 定量限（Limit of Quantitative, LOQ） 线性（Linearity） 试验方法 范围（Range） 范围（Range） 范围（单体药物） 范围（中药和复方制剂） ? 耐用性（Robustness） 耐用性（Robustness） 典型的变动因素（液相色谱法） 典型的变动因素（气相色谱法） 典型的变动因素（薄层色谱法） 耐用性（Robustness） 经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效 讨 论 讨 论 讨 论 系指在一些可能存在的其他成分（包括杂质、降解物、基质等）存在时，采用的方法能准确可靠测定出药材、饮片、提取物及中药制剂中被测成分的能力。 一种分析方法缺乏专属性时，可由其他辅助的分析方法作补充。 常用的试验方法: 空白阴性对照试验 比较同一分析系统对照品与供试品相应色谱峰的吸收光谱的一致性 色谱-质谱联用验证待测成分 空白阴性对照试验的试验要求 TLC：目测观察，空白阴性对照应不得显与供试品检测成分相应的斑点。 HPLC/GC/TLCS：空白阴性对照色谱中，在与相应对照品保留时间相应的位置应无色谱峰或其峰面积小于5% 空白阴性对照试验 除去待测药味，按规定的制法制成空白样品，按测定方法同法制备空白阴性对照溶液 测定成分为2种以上药材含有的，应分别制备每一药味的空白，及减去含有共同成分药味制备的空白 检测限系指供试品中被测物能被检测出的最低量。 试验方法： 直观法 仪器法（信噪比法） 采用已知浓度的对照品进行试验 直观法 如薄层色谱检测成分的检出量或毒性成分检出限量的确定。在薄层板上，以已知浓