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一、实验目的 1．熟悉普通光学显微镜的构造和各部分的功能； 2．学习掌握油镜的原理和方法。 三、材料和器皿 显微镜，香柏油，二甲苯； 金黄色葡萄球菌染色玻片标本，枯草芽孢杆菌染色玻片标本。 四、操作步骤 1．观察前的准备 （1）显微镜的安置：搬动显微镜时应用右手握住镜臂，左手托住底座，使镜身保持直立，并紧靠身体，切忌单手拎提。物镜的转换使用镜头转换器！！！ （2）视野明暗调节：通过电压调节光源强弱；调节聚光器虹彩光圈或聚光器高度的调节。 2. 用低倍镜观察玻片标本 （1） 放置标本：标本玻片用标本夹夹住，移动玻片夹推进器使观察对象处在物镜的正下方。下降10X物镜，使其接近标本，用粗调节器慢慢升起物镜，使标本在视野中初步聚焦，再使用细调节器调节图像清晰，通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找到合适的目的物，仔细观察并记录结果。 3．高倍镜观察 镜头转换，调节视野亮度，观察并记录结果 4．用油镜观察细菌 (1) 放置标本：将染色的细菌涂片置于镜台上。 (2) 找合适的视野：先用低倍镜寻找合适的视野，并将观察的部位移到视野中央。 (3) 转换油镜，将油镜转到工作位置。 (4) 调节聚光器与油镜数值孔径相一致：只要将聚光器上升到最高位置，可变光阑开到最大，此时两者的数值孔径即达到一致。 (5) 加香柏油 (6) 调焦 (7) 观察仔细观察细菌形态并将结果填入表中。 5．显微镜用毕后的处理 (1) 上升镜简取下玻片。 (2) 清洁显微镜 (3) 清洁后应将物镜转成“八”宇式，缓慢下降镜筒，使物镜搁在镜台上。将聚光器降到最低位置。反光镜转成垂直状。 (4) 去除涂片上的香柏油 五、注意事项 1．搬动显微镜时应用右手握住镜臂，左手托住底座，使镜身保持直立，并紧靠身体。切忌单手拎提。 2．各个镜面切忌用手涂抹，以免手上的油、汗污损镜面，造成日后发霉。 3．用二甲苯擦镜头时用量要少，不宜久抹，以防溶解胶粘透镜的树脂。切勿用乙醇擦镜头和支架。 4．因油镜的工作距离甚短，故操作时要特别谨慎，切忌采用眼睛对着目镜边观家边下降镜简的错误操作。 六、实验结果 1．将观察到的微生物形态画于下表中 革兰氏染色法 一、实验目的 1．学习微生物涂片、染色的基本技术； 2．学习掌握革兰氏的原理和方法。 二、基本原理（略） 三、材料和器皿 显微镜，香柏油，二甲苯，草酸铵结晶紫，沙黄或石炭酸复红，革兰氏染色液； 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌； 四、操作步骤 1．涂片：在洁净无油腻的玻片中央放—小滴水(或用接种环桃l-2环水)，用无菌的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。涂布面积约1 cm2。（载玻片要洁净无油迹；滴加生理盐水和取菌不宜过多；涂片要均匀，不宜过厚） 2. 干燥：自然风干。 3. 固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火3次(用手指触涂片反面以不烫手为宜)。待玻片冷却后再加染料。（固定温度不宜过高，以玻片不烫手为宜 ） 四、操作步骤 4. 初染：将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液（加量以盖满菌膜为度），染色1-2 min，水洗（水洗时，不要直接冲洗涂面，水流不宜过急过大）。 5. 媒染：用典液冲去残水，并用典液覆盖1 min，水洗。 6. 脱色：用滤纸吸去残水，将玻片倾斜，用滴管滴加95％乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时立即水洗，以终止脱色。脱色时间一般为20~30 s。 7. 复染：滴加沙黄液，染色2 min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。 四、操作步骤 8. 镜检：用油镜观察并绘细菌形态图于记录表中（涂片必须完全干燥后方能菌检）。 9. 混合涂片染色 10. 清理：实验完毕，清洁显微镜。有菌的玻片用洗衣粉水煮沸后，清洗干净。 五、实验结果 列表简述细菌染色观察结果（说明各菌的形状、颜色和革兰氏染色反应） 一、目的要求 　1．学习平板菌落计数法测定水中细菌总数 　2．学习多管发酵法测定水中大肠菌群MPN值 样品稀释程序 （1）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （2）另取1mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。 二、多管发酵法测大肠菌群的基本原理 大肠菌群概念 大肠菌群系指一群在37度能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽胞杆菌。 从种类上讲，大肠菌群包括许多生化及血清学特性均很不相同的细菌，其中有埃希氏菌属，枸椽酸菌属、肠杆菌属和克雷伯氏菌属等等．以埃希氏菌属为主，大肠菌群MPN是指在10