进出口燕窝及其制品中唾液酸含量的检测方法检验检疫标准管理信息.doc

进出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法 编制说明 任务来源 本检验方法标准的制定工作是按照国家认证认可监督管理委员会《关于下达2009年度出入境检验检疫行业标准制（修）订计划的通知》下达的任务而进行的，广东局承担研究制订检验检疫行业标准《出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法》任务，计划编号为2009B488k。考虑到大部分燕窝及其制品来源于进口，本标准改为为《进出口燕窝及其制品中唾液酸的测定方法》。 标准制定的意义 传统意义的燕窝是指金丝燕在人烟罕见的海岛悬崖峭壁上喂养育雏鸟而筑造的巢窝，燕窝是传统名贵滋补食品，主要产于东南亚国家和我国南海诸岛。 据有关统计资料表明，我国目前是世界第一的燕窝销售大国，2008年我国的燕窝销售额达到100多亿元。因为物稀价贵，特别是监督执法中缺乏有效的检验鉴别手段，导致市场上出现大量假冒伪劣产品，极大的损害了消费者的利益，扰乱了市场经济秩序。为了从根本上解决燕窝及其制品的真假鉴定难题，确定燕窝及其制品中唾液酸的含量等一系列问题，建立燕窝的定性、定量检测方法是当前工作中的迫切需要。 编制规则 本标准遵循GB/T 1.1-2000《标准化工作导则 第1部分：标准 的结构和编写规则》和GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》的编写规则。 4 标准编制依据和主要内容 本标准主要参考广东出入境检验检疫局的非标《燕窝及其制品中唾液酸含量的测定方法》。本行标主要制定了燕窝及其制品的样品前处理方法，试样中唾液酸的测定方法，包括二种测定方法：分光光度法与液相色谱-质谱/质谱 燕窝唾液酸(sialic acid)是一类神经氨酸的衍生物，广泛存在组织中，唾液酸唾液酸CAS编码英文通用名称Sialic acid 中文通用名称英文化学名称5-Acetamido-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galactononulosonic acid 中文化学名称 5-乙酰氨基-3, 5-二脱氧-D-甘油-D-半乳壬酮糖 理化性质分子式C11H19NO9 结构式 分子量性状描述 ,易溶于水,在水溶液中不发生变旋作用。纯的聚唾液酸是白色不定型高聚合物,在酸的作用下容易降解成单体的唾液酸。聚唾液酸水溶性优良,低黏度,生物相容性好,具有生物可降解性。纯的N-乙酰神经氨酸和N-羟乙酰神经氨酸在水溶液中很稳定, 4℃时贮藏数月不发生变化。如果溶液中含有非常微量的有机酸,其稳定性就受到很大的影响。二乙酰和三乙酰神经氨酸不稳定,在常温下易变成N-乙酰神经氨酸。　 作用,广泛存在于多种生物组织中,是构成细胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分,同时也是一种天然的大脑营养素, 它能增强婴儿的记忆力和促进智力的发育。 N-乙酰神经氨酸(唾液酸的一种)对病毒从感染的宿主细胞中释放新复制的病毒颗粒具有重要的作用。通过抑制N-乙酰神经氨酸可以干扰和阻止病毒的复制,达到治疗流感的目的。 6 检测方法与技术论证 6.1唾液酸标准曲线的制作 标准曲线：称取唾液酸标准品2mg，溶解定容到10mL，浓度为200μg/mL，再逐级稀释到100μg/mL、50μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL。分别取2mL，加入茚三酮指示剂2.5 g茚三酮 mL冰醋酸mL盐酸2mL与冰醋酸2mL，摇匀，在100℃水浴中显色10min，取出试管在流动水中迅速冷却，然后倒入1cm 比色皿中，在470nm波长处测定吸光度OD。得出如下表数据结果。 表 唾液酸标准溶液对应的吸光度浓度 （μg/mL） 吸光度 （470nm） 5 0.0407 10 0.1264 20 0.1979 50 0.4083 100 0.8714 200 1.5857 根据上述数据制作，得出唾液酸标准溶液浓度x与吸光度y的关系式： = 0.0081*x+0.026，相关系数r=0.9986，线性关系良好。 图 1 唾液酸标准溶液浓度对应的吸光度关系图 6.2燕窝的前处理过程 根据样品的状态分为2种前处理，即固态燕窝和液态的燕窝制品。 6.2.1 固态燕窝的前处理过程 取有代表性的燕窝样品烘干研磨过100目筛6.3.1 水解试剂的选择 6.3.1.1 水解试剂种类的单因素实验 离心10min分别取上清液2mL，加入茚三酮指示剂2mL与冰醋酸2mL，摇匀，在100℃水浴中显色10min，取出试管在流动水中迅速冷却，然后倒入1cm 比色皿中，在470nm波长处测定吸光度OD。 水解液呈半透明白色 30%盐酸 0.1202 0.301 2.89 水解液呈酱黑色，并有黑色渣体 20%醋酸 0.1202 1.317 12.59 水解液呈半透明白色 20%盐酸 0.1202 0.284 2.72 水解液呈酱黑色，并有少量黑色渣