[工学]2-高效液相色谱基础理论二.pdf

高效液相色谱基础知识高效液相色谱基础知识高效液相色谱基础知识高效液相色谱基础知识 天美科技液相培训教材（二） 第五章第五章第五章第五章 色谱柱的使用及保养色谱柱的使用及保养色谱柱的使用及保养色谱柱的使用及保养 主要内容主要内容主要内容主要内容：：：： 良好的色谱实验习惯 色谱柱的使用及操作色谱柱的使用及操作 色谱柱的保养 样品方面 流动相方面 在线的保护装置 保护柱保护柱 色谱柱的清洗 色谱柱的存放色谱柱的存放 色谱柱常见毛病问题 良好的色谱实验习惯良好的色谱实验习惯良好的色谱实验习惯良好的色谱实验习惯 • 拿拿到一根新色谱柱色谱柱时，先测柱柱效 • 保留在新色谱柱上测得的色谱图保留在新色谱柱上测得的色谱图，，并记录并记录 条件 • 定期检测柱效定期检测柱效 • 定期检测仪器的谱带展宽定期检测仪器的谱带展宽 色谱柱的使用及操作色谱柱的使用及操作色谱柱的使用及操作色谱柱的使用及操作 • 流动相的转换流动相的转换 – 特别是GPC柱 • 流速(压力)的变化幅度 •• 温度的变化幅度温度的变化幅度 • 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求 记住记住 ∶拿到拿到一根从未用过的色谱柱时根从未用过的色谱柱时 一定要先看其使用说明 ！ 色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养 （一）（一） • 样品方面样品方面 – 除去微粒及杂质 – 了解样品在流动相中的溶解度 如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解 度，防止其在流动相中析出 – 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用 色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养 （二）（二） • 流动相方面流动相方面 – 除去微粒 – 纯度的要求纯度的要求 • 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低 • 缓冲液的缓冲液的pHpH值值，，在填料的允许范围内在填料的允许范围内 • 缓冲液（盐）的浓度 • 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 • 溶剂中的杂质含量 – 流动相对样品的溶解度 • 有机溶剂或水的比例有机溶剂或水的比例 色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养 （三）（三）--在线的保护装置在线的保护装置在线的保护装置在线的保护装置 • 给色谱柱提供物理的保护给色谱柱提供物理的保护 – 除去样品及流动相中的颗粒 • 给色谱柱提供化学的保护给色谱柱提供化学的保护 – 防止分析柱被化学污染 • 装装置 – 在线过滤器 – 自装填料保护柱 – 预装保护柱 色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养 （（四四四四））--保护柱保护柱保护柱保护柱 • 可避免化学避免化学污染染。多数保多数保护柱柱影响响到整个色谱柱的柱效个色谱柱的柱效， 特别是在用微柱时 – GGuardd-PPakk预装保护柱预装保护柱 • 有各种填料的预装柱供选择，使用方便。填料容积 较小较小，也引起柱效降低也引起柱效降低 色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养色谱柱的保养 （（五五五五））--色谱柱的清洗色谱柱的清洗色谱柱的清洗色谱柱的清洗 • 对所做的样品要有充分的了解对所做的样品要有充分的了解 用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗 • 硅胶柱的一般方法 先用甲醇洗去极性杂质 用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200ml依次活化 • 键合相柱(烷基)的一般方法 20倍柱体积的：甲醇-二氯甲烷- 甲醇-水依次冲洗