实验四 液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸含量.doc

周次 日期 课时安排 3课时 课题 实验三 液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸含量 重点难点 教学目标 1、了解高效液相色谱仪的结构和工作原理； 2、理解苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱方法。 教学方法教学手段 1．要求学生实验前认真预习实验内容，实验前教师检查并批改预习报告，了解学生预习情况。 2．实验前先进行重点的讲解和示范基本操作、实验步骤中的注意事项，实验过程中巡回指导。GB/T 5009.29-2003 食品中山梨酸、苯甲酸的测定第二法? 高效液相色谱法 ?? 试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。 试剂 ?? 方法中所用试剂，除另有规则外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。 甲醇：经滤膜（0.5μm）过滤。 稀氨水（1+1）：氨水加水等体积混合。 乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45μm滤膜过滤。 碳酸氢钠溶液（20g/L）：称取2g碳酸氢钠（优级纯），加水至100mL，振摇溶解。 苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。 山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。 苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度经0.45μm滤膜过滤。 仪器 高效液相色谱仪（带紫外检测器） 分析步骤 试样处理汽水：称取5.00g~10.0g试样，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水（1+1）调pH约7。加水定容至10mL~20mL，经滤膜（HA 0.45μm）过滤。 果汁类：称取5.00g~10.0g试样，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经0.45μm滤膜过滤。 配制酒类：称取10.0g试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至适当体积，经0.45μm滤膜过滤。 高效液相色谱参考条件 柱：YWG-C18 4.6mm×250mm，10μm不锈钢柱。 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）（5:95）。 流速：1mL/min。 进样量：10μL。 检测器：紫外检测器，230nm波长。? 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。 2分钟出现的可能是溶剂峰 脱机文件 调用实验结果 推一针 浓度 峰面积 提取10ml雪碧（只含苯甲酸）稀释至50ml 稀释五倍 六个芒果（只含山梨酸） 4,5组 雪碧 样品 4,5组 芒果 样品 时间 样品＼序号 1 2 3 4 5 雪碧 芒果 6.5min 7min 苯甲酸 739 1803 3523 7347 10988 2257 ＼ 1836 10min 山梨酸 840 2108 4144 8477 12650 ＼ 5736 杂质 样品＼序号 1 2 3 4 5 浓度＼ug/ml 10 25 50 100 150 峰面积 739 1803 3523 7347 10988 840 2108 4144 8477 12650 数据处理： 雪碧检测样品中苯甲酸含量y=2257 代入标准曲线y=73.548x-47.704 得x=31.33 ug/ml 由于检测样品为稀释了五倍的雪碧， 所以c1=5*31.33=156.5ug/ml 芒果饮料检测样品中山梨酸含量y=5736 代入标准曲线y=84.55x-21.065 得x=68.10 ug/ml 由于检测样品为稀释了五倍的原饮料， 所以c3=340.5ug/ml 由GB中饮料的山梨酸含量不得超过200ug/ml， 碳酸饮料中苯甲酸含量不得超过500ug/ml， 可知测得样品符合国家标准。 芒果饮料的速溶图中5min处出现峰，并非苯甲酸。因为笨甲酸的峰出现时间为6.293min, 查配料表及其他数据可推出其为乙酰胺酸钾。 2 1